DOF: 19/10/1995
NORMA Oficial Mexicana NOM-112-SSA1-1994, Bienes y servicios. Determinación de bacterias coliformes. Técnica del número más probable.
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Diario Oficial de la Federación 1995

Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretaría de Salud.

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-112-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. DETERMINACION DE BACTERIAS COLIFORMES. TECNICA DEL NUMERO MAS PROBABLE.

JOSE MELJEM MOCTEZUMA, Director General de Control Sanitario de Bienes y Servicios, por acuerdo del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, con fundamento en los artículos 39 de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal; 38 fracción II, 47 de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización; 194 fracción I de la Ley General de Salud; 2o. fracción III, 34, 37, 40 y demás aplicables del Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades, Establecimientos, Productos y Servicios; 8o. fracción IV y 13 fracción I del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud, y

CONSIDERANDO

Que con fecha 28 de abril de 1994, en cumplimiento de lo previsto en el artículo 46 fracción I de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización la Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios presentó al Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, el anteproyecto de la presente Norma Oficial Mexicana.

Que con fecha 15 de agosto de 1994, en cumplimiento del acuerdo del Comité y lo previsto en el artículo 47 fracción I de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización, se publicó en el Diario Oficial de la Federación el proyecto de la presente Norma Oficial Mexicana a efecto que dentro de los siguientes noventa días naturales posteriores a dicha publicación, los interesados presentaran sus comentarios al Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario.

Que en fecha previa, fueron publicados en el Diario Oficial de la Federación las respuestas a los comentarios recibidos por el mencionado Comité, en términos del artículo 47 fracción III de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización.

Que en atención a las anteriores consideraciones, contando con la aprobación del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, se expide la siguiente:

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-112-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. DETERMINACION DE BACTERIAS COLIFORMES. TECNICA DEL NUMERO MAS PROBABLE.

PREFACIO

En la elaboración de la presente norma participaron los siguientes Organismos e Instituciones:

SECRETARIA DE SALUD

Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios

Laboratorio Nacional de Salud Pública

SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA Y DESARROLLO RURAL

Comisión Nacional del Agua

SECRETARIA DE MEDIO AMBIENTE, RECURSOS NATURALES Y PESCA

Instituto Nacional de la Pesca

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

INDUSTRIAS VINICOLAS PEDRO DOMECQ, S.A. DE C.V.

JUGOS DEL VALLE, S.A. DE C.V.

LABORATORIO FERMI, S.A.

LABORATORIO ICCABI, S.A. DE C.V.

LECHE INDUSTRIALIZADA CONASUPO, S.A. DE C.V. LICONSA

SIGMA ALIMENTOS, S.A. DE C.V.

SOCIEDAD MEXICANA DE NORMALIZACION Y CERTIFICACION, S.C.

NORMEX

INDICE

 0.     INTRODUCCION

 1.     OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACION

 2.     FUNDAMENTO

 3.     REFERENCIAS

 4.     DEFINICIONES

 5.     SIMBOLOS Y ABREVIATURAS

 6.     REACTIVOS Y MATERIALES

 7.     APARATOS E INSTRUMENTOS

 8.     PREPARACION DE LA MUESTRA

 9.     PROCEDIMIENTO

10.    EXPRESION DE LOS RESULTADOS

11.    INFORME DE LA PRUEBA

12.    CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES

13.    BIBLIOGRAFIA

14.    OBSERVANCIA DE LA NORMA

15.    VIGENCIA

0. Introducción

Las bacterias coliformes son un grupo heterogéneo compuesto por varios. Existe poca evidencia que indique que estas bacterias coliformes pertenezcan a un solo género taxonómico.

La falta de certeza en cuanto a su filiación taxonómica y la imprecisa correlación entre los métodos recomendados para la detección de coliformes han presentado problemas. El primero, es que Escherichia coli es aceptada como bacteria coliforme, la especie contiene variantes que no producen gas de la lactosa o lo hacen después de 48 horas, por lo que no se les identifica por medio de esta técnica. Segundo, la capacidad de fermentar la lactosa está frecuentemente asociada a genes localizados en plásmidos. Estos determinantes extracromosomales son fácilmente transferidos entre otras bacterias Gram negativas no relacionadas a las coliformes, que pueden, en consecuencia, ser recuperadas en la etapa inicial del análisis. No obstante en la práctica, la técnica ha demostrado su efectividad.

El número de organismos se establece mediante la cuenta de unidades formadoras de colonias (NOM-113-SSA1-1994. Método para la Cuenta de Microorganismos Coliformes Totales en Placa) o el uso de la técnica del número más probable. Esta última, también llamada técnica de dilución en tubo, proporciona una estimación estadística de la densidad microbiana presente con base a que la probabilidad de obtener tubos con crecimiento positivo disminuye conforme es menor el volumen de muestra inoculado.

1. Objetivo y campo de aplicación

1.1 Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiológico para estimar el número de coliformes presentes en productos alimenticios, por medio del cálculo del número más probable (NMP) después de la incubación a 35 °C de la muestra diluida en un medio líquido.

Este procedimiento puede aplicarse a agua potable, agua purificada, hielo y alimentos procesados térmicamente, así como a muestras destinadas a evaluar la eficiencia de prácticas sanitarias en la industria alimentaria. Este procedimiento debe seleccionarse cuando la densidad esperada es como mínimo de una bacteria en 10 ml de producto líquido o una bacteria por gramo de alimento sólido.

Cuando la densidad bacteriana sea menor que la aquí citada y si la naturaleza del alimento lo permite, utilizar el método de filtrado en membrana. Si la densidad microbiana se espera sea mayor a 100 por mililitro o gramo de muestra, ampliar el intervalo de diluciones o utilizar el método en placa.

1.2 Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el territorio nacional para las personas físicas o morales que requieran efectuar este método en productos nacionales o de importación, para fines oficiales.

2. Fundamento

El método se basa en que las bacterias coliformes, fermentan la lactosa incubadas a 35 ± 1°C durante 24 a 48 horas, resultando una producción de ácidos y gas el cual se manifiesta en las campanas de fermentación.

3. Referencias

Esta norma se complementa con lo siguiente:

NOM-109-SSA1-1994         Procedimientos para la Toma, Manejo y Transporte de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.[dcccxxx]*

NOM-110-SSA1-1994         Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.[dcccxxxi]*

4. Definiciones

Para fines de esta norma se entiende por:

Coliformes, bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o anaerobios facultativos, que a 35 °C fermentan la lactosa con la producción de gas bajo las condiciones especificadas en esta norma.

5. Símbolos y abreviaturas

Cuando en esta norma se haga referencia a los siguientes símbolos y abreviaturas se entiende por:

g                       gramo

ml                     mililitro

l                         litro

mm                  milímetro

°C                     grado Celsius

%                      por ciento

pH                    potencial de hidrógeno

N                       normal

NMP                 número más probable

6. Reactivos y materiales

Los reactivos que a continuación se mencionan deben ser grado analítico. Cuando se indique agua debe entenderse como agua destilada con pH cercano a la neutralidad.

6.1 Reactivos

6.1.1 Soluciones diluyentes

6.1.1.1 Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada)

                                                     FORMULA

INGREDIENTES                                                                                                  CANTIDADES

Fosfato monopotásico                                                                                                              34,0 g

Agua                                                                                                                                                1,0 l

Preparación:

Disolver el fosfato en 500 ml de agua y ajustar el pH a 7,2 con solución de hidróxido de sodio 1 N.

Llevar a un litro con agua.

Esterilizar durante 15 minutos a 121 ± 1,0 °C.

Conservar en refrigeración (solución concentrada).

Tomar 1,25 ml de la solución concentrada y llevar a un litro con agua.

Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml según se requiera.

Esterilizar durante 15 minutos a 121 ± 1 °C.

Después de la esterilización, el pH y los volúmenes finales de la solución de trabajo deben ser iguales a los iniciales.

6.1.1.2. Agua peptonada

                                                     FORMULA

INGREDIENTES                                                                                                  CANTIDADES

Peptona                                                                                                                                          1,0 g

Cloruro de sodio                                                                                                                           8,5 g

Agua                                                                                                                                                1,0 l

Preparación:

Disolver los componentes en un litro de agua.

Ajustar el pH a 7,0 con hidróxido de sodio 1 N.

Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml o en cualquier volumen múltiplo de nueve según se requiera.

Esterilizar durante 15 minutos a 121 ± 1,0 °C.

Después de la esterilización los volúmenes finales de la solución de trabajo deben ser iguales a los iniciales.

Si este diluyente no es usado inmediatamente, almacenar en lugar obscuro a una temperatura entre 0 a 5 °C por un tiempo no mayor de un mes, en condiciones tales que no alteren su volumen o composición.

6.1.2 Medios de cultivo.

Caldo lactosado (medio de enriquecimiento para agua potable y hielo).

Caldo lauril sulfato triptosa (medio de enriquecimiento selectivo).

Caldo lactosa bilis verde brillante (medio de confirmación).

En el caso del análisis de agua potable y hielo puede utilizarse caldo lactosado o caldo lauril sulfato triptosa con púrpura de bromocresol (concentración 0,01 g/l de medio), como alternativa al uso de campanas de fermentación. Los tubos positivos se manifiestan por el vire del indicador a color amarillo.

6.1.2.1 Caldo lactosado

CUADRO 1

                  Ingrediente                              Medio de                                Medio de

                                               concentración 1,5                concentración

                                                                                               sencilla

                   Extracto de carne                                  4,5 g                                       3,0 g

                   Peptona de gelatina                             7,5 g                                       5,0 g

                   Lactosa                                                   7,5 g                                       5,0 g

                   Agua destilada                               1000,0 ml                              1000,0 ml

Disolver los ingredientes en 1 l de agua, calentando si es necesario o el medio completo deshidratado, siguiendo las instrucciones del fabricante.

Ajustar el pH final de tal manera que después de la esterilización éste sea de 6,9 ± 0,2 a 25 °C.

Distribuir en volúmenes de 10 ml en tubos con dimensiones de 16 x 160 mm el medio de concentración sencilla y de 20 ml en tubos de 20 x 200 mm el medio de concentración 1,5, cada tubo debe tener campana de fermentación.

Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 121 ± 1,0 °C.

Enfriar rápidamente para evitar una exposición excesiva al calor. El aspecto del caldo es claro y de color beige.

Se puede utilizar una concentración doble del medio de cultivo, en cuyo caso se emplearán 10 ml del caldo preparado, cuando se agreguen 10 ml de la muestra.

6.1.2.2 Caldo lauril sulfato triptosa.

CUADRO 2

                  Ingrediente                                  Medio de                              Medio de

                                                  concentración 1,5              concentración

                                                                                                 sencilla

                   Triptosa                                                30,0         g                             20,0         g

                   Lactosa                                                   7,5         g                               5,0         g

                   Fosfato dipotásico                                4,125    g                               2,75      g

                   Fosfato monopotásico                         4,125    g                               2,75      g

                   Cloruro de sodio                                   7,50      g                               5,0         g

                   Lauril sulfato de sodio                         0,15      g                               0,1         g

                   Agua destilada                               1000,0         ml                      1000,0         ml

Disolver los componentes en 1 l de agua, calentando si es necesario o el medio de cultivo completo deshidratado, siguiendo las instrucciones del fabricante.

Ajustar el pH de tal manera que después de la esterilización éste sea de 6,8 ± 0,2 a 25 °C.

Distribuir en volúmenes de 10 ml en tubos con dimensiones de 16 x 160 mm el medio de concentración sencilla y de 20 ml en tubos de 20 x 200 mm el medio de concentración 1,5, cada tubo debe tener campana de fermentación.

Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 121 ± 1,0 °C.

Se recomienda almacenar el medio una vez preparado.

Las campanas de fermentación no deben de contener burbujas de aire después de la esterilización.

Se puede utilizar una concentración doble del medio de cultivo, en cuyo caso se emplearán 10 ml de caldo preparado, cuando se agreguen 10 ml de muestra.

6.1.2.3 Caldo lactosa bilis verde brillante

FORMULA

INGREDIENTES                                                                                                  CANTIDADES

Peptona                                                                                                                                  10,0         g

Lactosa                                                                                                                                  10,0         g

Sales biliares                                                                                                                        20,0         g

Verde brillante                                                                                                                                0,0133  g

Agua                                                                                                                                          1,0         l

Disolver los componentes o el medio completo deshidratado en agua, calentar si es necesario.

Ajustar el pH, de tal manera que después de la esterilización éste sea de 7,2 a 25 °C.

Distribuir el medio en cantidades de 10 ml en tubos de 16 X 160 mm conteniendo campana de fermentación.

Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 121 ± 1,0 °C.

Las campanas de fermentación no deben contener burbujas de aire después de la esterilización.

6.2 Materiales

Pipetas bacteriológicas para distribuir 10 y 1 ml (o si es necesario de 11 y 2 ml), con tapón de algodón. Las pipetas pueden ser graduadas en volúmenes iguales a una décima de su volumen total.

Frascos de vidrio de 250 ml con tapón de rosca.

Utensilios esterilizables para la obtención de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas, etc.

Tubos de cultivo 20 x 200 mm y de 16 x 160 mm con tapones metálicos o de rosca.

Campanas de fermentación (tubos de Durham).

Pipetas bacteriológicas graduadas de 10 y 1 ml.

Gradillas.

Asa de platino o nicromel de aproximadamente 3 mm de diámetro.

Todo el material que tenga contacto con las muestras bajo estudio debe esterilizarse mediante:

Horno, durante 2 horas a 170 a 175 °C o 1 h a 180 °C o autoclave, durante 15 minutos como mínimo a 121 ± 1,0 °C.

El material de vidrio puede sustituirse por material desechable que cumpla con las especificaciones deseadas. No debe usarse material de vidrio dañado por las esterilizaciones repetidas y éste debe ser químicamente inerte.

7. Aparatos e instrumentos

Horno para esterilizar que alcance una temperatura mínima de 170 °C.

Incubadora con termostato que evite variaciones mayores de ± 1,0 °C, provista con termómetro calibrado.

Termómetro de máximas y mínimas.

Autoclave que alcance una temperatura mínima de 121 ± 1,0 °C.

Potenciómetro con una escala mínima de 0,1 unidades de pH a 25 °C.

8. Preparación de la muestra

Las muestras deben prepararse y diluirse, siempre que sea posible, de acuerdo a la NOM-110-SSA1-1994. Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.

9. Procedimiento

9.1 Para agua potable y hielo

9.1.1 Prueba presuntiva

9.1.1.1 Inoculación. Agitar la muestra. Transferir volúmenes de 10 ml de muestra a cada uno de 5 tubos con 20 ml de caldo lactosado de mayor concentración y 1,0 ml y 0,1 ml de muestra a cada uno de los tubos de las series de 5 respectivamente con 10 ml de caldo lactosado de concentración sencilla o caldo lauril sulfato triptosa con púrpura de bromocresol. (Ver punto 6.1.2)

9.1.1.2 Incubación. Incubar los tubos a 35 °C. Examinar a las 24 ± 2 h y observar si hay formación de gas o la formación de gas no se observa en este tiempo, incubar por 48 ± 2 h.

9.1.2 Prueba confirmativa

De cada tubo que muestre formación de gas, tomar una azada y sembrar en un número igual de tubos con medio de confirmación, caldo lactosa lauril bilis verde brillante. Incubar a 35 ± 0,5 °C por 24 ± 2 horas o si la formación de gas no se observa en este tiempo, incubar por 48 ± 2 horas.

En esta Norma Oficial Mexicana, para el análisis de agua potable, agua purificada así como hielo, se emplea la serie de 5 tubos inoculados, 5 tubos con 10 ml, 5 tubos con 1 ml y 5 tubos con 0,1 ml, veáse el cuadro 4.

9.2 Para alimentos.

Preparar suficiente número de diluciones para asegurar que todos los tubos correspondientes a la última dilución rindan un resultado negativo.

9.2.1 Prueba presuntiva

9.2.1.1 Inoculación. Tomar tres tubos de medio de enriquecimiento de mayor concentración. Usar una pipeta estéril para tranferir a cada tubo 10 ml de la muestra si es líquida o 10 ml de la dilución primaria inicial, en el caso de otros productos.

9.2.1.1.1 Tomar tres tubos de concentración sencilla del medio selectivo de enriquecimiento. Usar una pipeta estéril para transferir a cada uno de estos tubos 1 ml de la muestra si es líquida o 1 ml de la dilución primaria en el caso de otros productos.

9.2.1.1.2 Para las diluciones subsecuentes, continuar como se indica en el párrafo anterior, usando una pipeta diferente para cada dilución. Mezclar suavemente el inóculo con el medio.

9.2.1.2 Incubación. Incubar los tubos a 35 ± 0,5 °C por 24 ± 2 horas y observar si hay formación de gas, en caso contrario prolongar la incubación hasta 48 ± 2 horas.

9.2.2 Prueba confirmativa

De cada tubo que muestre formación de gas, tomar una azada y sembrar en un número igual de tubos con medio de confirmación. Incubar a 35 ± 0,5 °C por 24 ± 2 horas o si la formación de gas no se observa en este tiempo, prolongar la incubación por 48 ± 2 horas.

En esta Norma Oficial Mexicana se considera una combinación de tres tubos por cada dilución de la serie. Para algunos productos y siempre que se requiera una mayor precisión en los resultados, será necesario inocular una serie de cinco o diez tubos.

10. Expresión de los resultados

Tomar la serie de tubos de la prueba confirmativa que dé formación de gas después del periodo de incubación requerido y buscar el NMP en los cuadros correspondientes.

El cuadro 3 muestra algunos ejemplos que se pueden presentar.

Ejemplos: Ejemplo 1. Cuando sólo una dilución muestra tres tubos positivos, elegir ésta y las diluciones mayores posteriores.

Ejemplo 2. Cuando más de una dilución muestra tres tubos positivos y la última da menos de tres, elegir esta última y las dos diluciones anteriores más bajas.

Ejemplo 3. Cuando en ninguna dilución hay tres tubos positivos y éstos se encuentran en más de tres diluciones, seleccionar las dos diluciones mayores positivas y la siguiente.

Ejemplos 4 y 5. Cuando los tubos positivos sólo se encuentran en la muestra sin diluir (10 ml o 1 g) y en la primera dilución (1 ml o 10-1 g), seleccionar las tres primeras diluciones para el cálculo del número más probable.

En cada caso se obtiene un número de tres cifras, lo cual es representado en los cuadros 4 al 7, según corresponda. En la columna que indica el número de tubos positivos se busca el índice del NMP.

La técnica de NMP puede admitir gran cantidad de variaciones. Los resultados obtenidos con esta técnica deben ser utilizados con precaución. Los límites de confianza están representados en los cuadros 4 al 7. Por ejemplo, para una muestra sólida con un NMP de 70 coliformes por gramo, los límites de confianza en el 95% de los casos variarán de 10 a 230 coliformes por gramo (ejemplo 3 del cuadro 3) y en un producto con 24 de NMP de coliformes por gramo, los límites de confianza son de 3,6 a 130 coliformes por gramo (ejemplo 2 cuadro 3).

CUADRO 3.- Ejemplos de la selección de resultados positivos para el cálculo del NMP.

                   Número de tubos positivos obtenidos de tres                                    NMP[dcccxxxii]b

E                       tubos incubados, para las siguientes cantidades

J                       de muestra inoculada por tubo[dcccxxxiii]a

E                       Producto

M                       líquido              (ml)      10    1        10-1                   10-2                   10-3                               Producto                     Otros

P

L                       Otros

O                       productos        (g)       1      10-1             10-2                   10-3                   10-4                               líquido                           productos

                                    mayor dilución = menor concentración

                                                                                           ml-1                                                                          g-1

1                                                           3        3        2          1        0            15        (5)[dcccxxxiv]*       150      (6)[dcccxxxv]*

2                                                           3        3        3          0                      24        (5)[dcccxxxvi]*       240      (6)[dcccxxxvii]*

3                                                           2        2        1          1        0            7          (6)[dcccxxxviii]*     70        (7)[dcccxxxix]*

4                                                           3        3        0          0        0            2,4       (4)[dcccxl]* 24        (5)[dcccxli]*

5                                                           2        2        0          1        0            0,21     (4)[dcccxlii]* 2,1     (5)[dcccxliii]*

CUADRO 4. Indice del NMP y límites de confianza 95% para varias combinaciones de resultados positivos cuando son usados varios números de tubos. (Diluciones 10, 1,0 y 0,1 g)[dcccxliv]a

                               3 tubos por dilución                       5 tubos por dilución

combinación      índice                                   95% Límites de   índice                               95% Límites de

       de             del NMP                      confianza                       del NMP                  confianza

positivos             por g                     bajo                  alto                por g               bajo                  alto

       0-0-0                  <0,03                <0,005                   <0,09          <0,02            <0,005                   <0,07

       0-0-1                    0,03                <0,005                   <0,09            0,02            <0,005                     0,07

       0-1-0                    0,03                <0,005                     0,13            0,02            <0,005                     0,07

       0-2-0                    --                      --                               --                  0,04            <0,005                     0,11

       1-0-0                    0,04                <0,005                    0,20            0,02            <0,005                     0,07

       1-0-1                    0,07                0,01                         0,21            0,04            <0,005                     0,11

       1-1-0                    0,07                0,01                         0,23            0,04            <0,005                     0,11

       1-1-1                    0,11                0,03                         0,36            0,06            <0,005                     0,15

       1-2-0                    0,11                0,03                         0,36            0,06            <0,005                     0,15

       2-0-0                    0,09                0,01                         0,36            0,05            <0,005                     0,13

       2-0-1                    0,14                0,03                         0,37            0,07            0,01                          0,17

       2-1-0                    0,15                0,03                         0,44            0,07            0,01                          0,17

       2-1-1                    0,20                0,07                         0,89            0,09            0,02                          0,21

       2-2-0                    0,21                0,04                         0,47            0,09            0,02                          0,21

       2-2-1                    0,28                0,10                         1,50            --                  --                              --

       2-3-0                    --                      --                               --                  0,12            0,03                          0,28

       3-0-0                    0,23                0,04                         1,20            0,08            0,01                          0,19

       3-0-1                    0,39                0,07                         1,3              0,11            0,02                          0,25

       3-0-2                    0,64                0,15                         3,80            --                  --                              --

       3-1-0                    0,43                0,07                         2,1              0,11            0,02                          0,25

       3-1-1                    0,75                0,14                         2,3              0,14            0,04                          0,34

       3-1-2                    1,20                0,30                         3,8              --                  --                              --

       3-2-0                    0,93                0,15                         3,80            0,14            0,04                          0,34

       3-2-1                    1,50                0,30                         4,40            0,17            0,05                          0,46

       3-2-2                    2,10                0,35                         4,70            --                  --                              --

       3-3-0                    2,40                0,36                       13,0              --                  --                              --

       3-3-1                    4,60                0,71                       24,0              --                  --                              --

       3-3-2                  11,0                   1,50                       48,0              --                  --                              --

       3-3-3               >11,0                   >1,50                   >48,0              --                  --                              --

       4-0-0                    --                                                                            0,13            0,03                          0,31

       4-0-1                    --                                                                            0,17            0,05                          0,46

       4-1-0                    --                                                                            0,17            0,05                          0,46

       4-1-1                    --                                                                            0,21            0,07                          0,63

       4-1-2                    --                                                                            0,26            0,09                          0,78

       4-2-0                    --                                                                            0,22            0,07                          0,67

       4-2-1                    --                                                                            0,26            0,09                          0,78

       4-3-0                    --                                                                            0,27            0,09                          0,80

       4-3-1                    --                                                                            0,33            0,11                          0,93

       4-4-0                    --                                                                            0,34            0,12                          0,93

       5-0-0                    --                                                                            0,23            0,07                          0,70

       5-0-1                    --                                                                            0,31            0,11                          0,89

       5-0-2                    --                                                                            0,43            0,15                          1,14

       5-1-0                    --                                                                            0,33            0,11                          0,93

       5-1-1                    --                                                                            0,46            0,16                          1,2

       5-1-2                    --                                                                            0,63            0,21                          1,5

       5-2-0                    --                                                                            0,49            0,17                          1,3

       5-2-1                    --                                                                            0,70            0,23                          1,70

       5-2-2                    --                                                                            0,94            0,28                          2,2

       5-3-0                    --                                                                            0,79            0,25                          1,9

       5-3-1                    --                                                                            1,10            0,31                          2,5

       5-3-2                    --                                                                            1,4               0,37                          3,4

       5-3-3                    --                                                                            1,80            0,44                          5,0

       5-4-0                    --                                                                            1,30            0,35                          3,0

       5-4-1                    --                                                                            1,70            0,43                          4,9

       5-4-2                    --                                                                            2,20            0,57                          7,0

       5-4-3                    --                                                                            2,80            0,90                          8,5

       5-4-4                    --                                                                            3,50            1,20                       10,0

       5-5-0                    --                                                                            2,40            0,68                          7,5

       5-5-1                    --                                                                            3,50            1,60                       10,0

       5-5-2                    --                                                                            5,40            1,80                       14,0

       5-5-3                    --                                                                            9,20            3,0                          32,0

       5-5-4                    --                                                                         16,09            6,40                       58,0

       5-5-5                    --                                                                           --                  --                              --

CUADRO 5. Indice del NMP y límites de confianza 95% para varias combinaciones de resultados positivos cuando son usados varios números de tubos. (Diluciones 1,0, 0,1 y 0,01 g)[dcccxlv]a

                               3 tubos por dilución                       5 tubos por dilución

combinación      índice                                   95% Límites de   índice                               95% Límites de

       de             del NMP                      confianza                       del NMP                  confianza

positivos             por g                     bajo                  alto                por g               bajo                  alto

       0-0-0                  <0,3                   <0,05                     <0,9            <0,2               <0,05                     <0,7

       0-0-1                   0,3                   <0,05                     <0,9             0,2               <0,05                      0,7

       0-1-0                   0,3                   <0,05                      1,3             0,2               <0,05                      0,7

       0-2-0                    --                      --                              --                 0,4               <0,05                      0,11

       1-0-0                    0,4                   <0,05                      2,0             0,2               <0,05                      0,7

       1-0-1                    0,7                   0,1                          2,0             0,4               <0,05                      1,1

       1-1-0                    0,7                   0,1                          2,3             0,4               <0,05                      1,1

       1-1-1                    1,1                   0,3                          3,6             0,6               <0,05                      1,5

       1-2-0                    1,1                   0,3                          3,6             0,6               <0,05                      1,5

       2-0-0                    0,9                   0,1                          3,6             0,5               <0,05                      1,3

       2-0-1                    1,4                   0,3                          3,7             0,7               0,1                          1,7

       2-1-0                    1,5                   0,3                          4,4             0,7               0,1                          1,7

       2-1-1                    2,0                   0,7                          8,9             0,9               0,2                          2,1

       2-2-0                    2,1                   0,4                          4,7             0,9               0,2                          2,1

       2-2-1                    2,8                   1,0                         15,0              --                  --                              --

       2-3-0                    --                      --                              --                 1,2               0,3                          2,8

       3-0-0                    2,3                   0,4                         12,0             0,8               0,1                          1,9

       3-0-1                    3,9                   0,7                         13,0             1,1               0,2                          2,5

       3-0-2                    6,4                   1,5                         38,0              --                  --                              --

       3-1-0                    4,3                   0,7                         21,0             1,1               0,2                          2,5

       3-1-1                    7,5                   1,4                         23,0             1,4               0,4                           3,4

       3-1-2                  12,0                   3,0                         38,0             --                  --                               --

       3-2-0                    9,3                   1,5                         38,0             1,4               0,4                           3,4

       3-2-1                  15,0                   3,0                         44,0             1,7               0,5                           4,6

       3-2-2                  21,0                   3,5                         47,0             --                  --                               --

       3-3-0                  24,0                   3,6                      130,0             --                  --                               --

       3-3-1                  46,0                   7,1                      240,0             --                  --                               --

       3-3-2               110,0                   15,0                     480,0             --                  --                               --

       3-3-3             >110,0                   >15,0                >480,0             --                  --                               --

       4-0-0                    --                                                                           1,3               0,3                           3,1

       4-0-1                    --                                                                           1,7               0,5                           4,6

       4-1-0                    --                                                                           1,7               0,5                           4,6

       4-1-1                    --                                                                           2,1               0,7                           6,3

       4-1-2                    --                                                                           2,6               0,9                           7,8

       4-2-0                    --                                                                           2,2               0,7                           6,7

       4-2-1                    --                                                                           2,6               0,9                           7,8

       4-3-0                    --                                                                           2,7               0,9                           8,0

       4-3-1                    --                                                                           3,3               1,1                           9,3

       4-4-0                    --                                                                           3,4               1,2                           9,3

       5-0-0                    --                                                                           2,3               0,7                           7,0

       5-0-1                    --                                                                           3,1               1,1                           8,9

       5-0-2                    --                                                                           4,3               1,5                         11,4

       5-1-0                    --                                                                           3,3               1,1                           9,3

       5-1-1                    --                                                                           4,6               1,6                         12,0

       5-1-2                    --                                                                           6,3               2,1                         15,0

       5-2-0                    --                                                                           4,9               1,7                         13,0

       5-2-1                    --                                                                           7,0               2,3                         17,0

       5-2-2                    --                                                                           9,4               2,8                         22,0

       5-3-0                    --                                                                           7,9               2,5                         19,0

       5-3-1                    --                                                                         11,0               3,1                         25,0

       5-3-2                    --                                                                         14,0               3,7                         34,0

       5-3-3                    --                                                                         18,0               4,4                         50,0

       5-4-0                    --                                                                         13,0               3,5                         30,0

       5-4-1                    --                                                                         17,0               4,3                         49,0

       5-4-2                    --                                                                         22,0               5,7                         70,0

       5-4-3                    --                                                                         28,0               9,0                         85,0

       5-4-4                    --                                                                         35,0               12,0                     100,0

       5-5-0                    --                                                                         24,0               6,8                          75,0

       5-5-1                    --                                                                         35,0               12,0                     100,0

       5-5-2                    --                                                                         54,0               18,0                     140,0

       5-5-3                    --                                                                         92,0               30,0                     320,0

       5-5-4                    --                                                                       161,0               64,0                     580,0

       5-5-5                    --                                                                     >161,0               >64,0                >580,0

CUADRO 6. Indice del NMP y límites de confianza 95% para varias combinaciones de resultados positivos cuando son usados varios números de tubos. (Diluciones 0,1, 0,01 y 0,001 g)[dcccxlvi]a

                               3 tubos por dilución                                            5 tubos por dilución

combinación      índice                                   95% Límites de   índice                               95% Límites de

       de             del NMP                      confianza                       del NMP                  confianza

positivos               por g                   bajo                  alto                por g               bajo                  alto

0-0-0                      <3                       <0,5           <9                       <2                      <0,5          <7

0-0-1                        3                       <0,5             9                          2                      <0,5            7

0-1-0                        3                       <0,5           13                         2                      <0,5           7

0-2-0                        --                        --                 --                         4                      <0,5         11

1-0-0                        4                       <0,5           20                         2                      <0,5           7

1-0-1                        7                         1              21                         4                      <0,5         11

1-1-0                        7                         1              23                         4                      <0,5         11

1-1-1                      11                         3              36                         6                      <0,5         15

1-2-0                      11                         3              36                         6                      <0,5         15

2-0-0                        9                         1              36                         5                      <0,5         13

2-0-1                      14                         3              37                         7                         1,0         17

2-1-0                      15                         3              44                         7                         1,0         17

2-1-1                      20                         7              89                         9                         2,0         21

2-2-0                      21                         4              47                         9                         2,0         21

2-2-1                      28                      10             150                         --                        --               --

2-3-0                        --                        --                 --                      12                         3,0         28

3-0-0                      23                         4             120                         8                         1,0         19

3-0-1                      39                         7               13                      11                         2,0         25

3-0-2                      64                      15             380                         --                        --               --

3-1-0                      43                         7             210                      11                         2,0         25

3-1-1                      75                      14             230                      14                         4,0         34

3-1-2                   120                      30             380                        --                        --               --

3-2-0                      93                      15             380                      14                         4,0         34

3-2-1                   150                      30             440                      17                         5,0         46

3-2-2                   210                      35             470                        --                        --               --

3-3-0                   240                      36             130                        --                        --               --

3-3-1                   460                      71             240                        --                        --               --

3-3-2                 1100                    150             480                        --                        --               --

3-3-3               >1100                   >150           >480                        --                        --               --

4-0-0                        --                                                                      13                         3,0         31

4-0-1                        --                                                                      17                         5,0         46

4-1-0                        --                                                                      17                         5,0         46

4-1-1                        --                                                                      21                         7,0         63

4-1-2                        --                                                                      26                         9,0         78

4-2-0                        --                                                                      22                         7,0         67

4-2-1                        --                                                                      26                         9,0         78

4-3-0                        --                                                                      27                         9,0         80

4-3-1                        --                                                                      33                      11,0         93

4-4-0                        --                                                                      34                      12,0         93

5-0-0                        --                                                                      23                         7,0         70

5-0-1                        --                                                                      31                      11,0         89

5-0-2                        --                                                                      43                      15,0       114

5-1-0                        --                                                                      33                      11,0         93

5-1-1                        --                                                                      46                      16,0       120

5-1-2                        --                                                                      63                      21,0       150

5-2-0                        --                                                                      49                      17,0       130

5-2-1                        --                                                                      70                      23,0       170

5-2-2                        --                                                                      94                      28,0       220

5-3-0                        --                                                                      79                      25,0       190

5-3-1                        --                                                                     110                      31,0       250

5-3-2                        --                                                                     140                      37,0       340

5-3-3                        --                                                                     180                      44,0       500

5-4-0                        --                                                                     130                      35,0       300

5-4-1                        --                                                                     170                      43,0       490

5-4-2                        --                                                                     220                      57,0       700

5-4-3                        --                                                                     280                      90,0       850

5-4-4                        --                                                                     350                    120,0     1000

5-5-0                        --                                                                     240                      68,0       750

5-5-1                        --                                                                     350                    120,0     1000

5-5-2                        --                                                                     540                    180,0     1400

5-5-3                        --                                                                     920                    300,0     3200

5-5-4                        --                                                                   1600                    640,0     5800

5-5-5                        --                                                                >1600                   >640,0   >5800

CUADRO 7. Indice del NMP y límites de confianza 95% para varias combinaciones de resultados positivos cuando son usados varios números de tubos. (Diluciones 0,01, 0,001 y 0,0001 g)[dcccxlvii]a

                               3 tubos por dilución                                           5 tubos por dilución

combinación      índice                                   95% Límites de   índice                               95% Límites de

       de             del NMP                      confianza                       del NMP                  confianza

positivos               por g                   bajo                  alto                por g               bajo                  alto

0-0-0                   <30                        <5          <90                       <20                    <5           <70

0-0-1                      30                        <5          <90                         20                    <5             70

0-1-0                      30                        <5          130                        20                    <5            70

0-2-0                        --                          --               --                        40                    <5          110

1-0-0                      40                        <5          200                        20                    <5            70

1-0-1                      70                        10          210                        40                    <5          110

1-1-0                      70                        10          230                        40                    <5          110

1-1-1                   110                        30          360                        60                    <5          150

1-2-0                   110                        30          360                        60                    <5          150

2-0-0                      90                        10          360                        50                    <5          130

2-0-1                   140                        30          370                        70                    10          170

2-1-0                   150                        30          440                        70                    10          170

2-1-1                   200                        70          890                        90                    20          210

2-2-0                   210                        40          470                        90                    20          210

2-2-1                   280                      100         1500                          --                      --               --

2-3-0                        --                          --               --                      120                    30          280

3-0-0                   230                        40         1200                        80                    10          190

3-0-1                   390                        70         1300                      110                    20          250

3-0-2                   640                      150         3800                          --                      --               --

3-1-0                   430                        70         2100                      110                    20          250

3-1-1                   750                      140         2300                      140                    40          340

3-1-2                 1200                      300         3800                          --                      --               --

3-2-0                   930                      150         3800                      140                    40          340

3-2-1                 1500                      300         4400                      170                    50          460

3-2-2                 2100                      350         4700                          --                      --               --

3-3-0                 2400                      360      13000                          --                      --               --

3-3-1                 4600                      710      24000                          --                      --               --

3-3-2               11000                    1500      48000                          --                      --               --

3-3-3            >11000                  >1500    >48000                          --                      --               --

4-0-0                        --                                                                      130                    30          310

4-0-1                        --                                                                      170                    50          460

4-1-0                        --                                                                      170                    50          460

4-1-1                        --                                                                      210                    70          630

4-1-2                        --                                                                      260                    90          780

4-2-0                        --                                                                      220                    70          670

4-2-1                        --                                                                      260                    90          780

4-3-0                        --                                                                      270                    90          800

4-3-1                        --                                                                      330                  110          930

4-4-0                        --                                                                      340                  120          930

5-0-0                        --                                                                      230                    70          700

5-0-1                        --                                                                      310                  110          890

5-0-2                        --                                                                      430                  150        1140

5-1-0                        --                                                                      330                  110          930

5-1-1                        --                                                                      460                  160        1200

5-1-2                        --                                                                      630                  210        1500

5-2-0                        --                                                                      490                  170        1300

5-2-1                        --                                                                      700                  230        1700

5-2-2                        --                                                                      940                  280        2200

5-3-0                        --                                                                      790                  250        1900

5-3-1                        --                                                                     1100                  310        2500

5-3-2                        --                                                                     1400                  370        3400

5-3-3                        --                                                                     1800                  440        5000

5-4-0                        --                                                                     1300                  350        3000

5-4-1                        --                                                                     1700                  430        4900

5-4-2                        --                                                                     2200                  570        7000

5-4-3                        --                                                                     2800                  900        8500

5-4-4                        --                                                                     3500                1200      10000

5-5-0                        --                                                                     2400                  680        7500

5-5-1                        --                                                                     3500                1200      10000

5-5-2                        --                                                                     5400                1800      14000

5-5-3                        --                                                                     9200                3000      32000

5-5-4                        --                                                                  16000                6400      58000

5-5-5                        --                                                                >16000              >6400    >58000

11. Informe de la prueba

Informar "Número más probable (NMP) de coliformes por gramo o mililitro de muestra".

En caso de muestras de agua informar NMP/100 ml.

12. Concordancia con normas internacionales

Esta norma no tiene concordancia con normas internacionales.

13. Bibliografía

13.1 Secretaría de Comercio y Fomento Industrial. 1992. Ley Federal sobre Metrología y Normalización. Diario Oficial de la Federación. México, D.F.

13.2 Secretaría de Salud. 1984. Ley General de Salud. Diario Oficial de la Federación. México, D.F.

13.3 Secretaría de Salud. 1988. Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades, Establecimientos, Productos y Servicios. Diario Oficial de la Federación. México, D.F.

13.4 Secretaría de Comercio y Fomento Industrial. NOM-008-SCFI-1993. Norma Oficial Mexicana. Sistema General de Unidades de Medida.

13.5 Bacteriological Analytical Manual. 1984. Food and Drugs Administration FDA. Bureau of Foods. Division of Microbiology. 6a Ed. Washington, D.C.

13.6 Norma ISO 4831 2a. 1991. Microbiology - General guidance for the enumeration of coliforms - Most probable number technique. International Organization for Standardization.

13.7 Secretaría de Comercio y Fomento Industrial. NORMA-Z-013/02. 1981. Guía para la Redacción, Estructuración y Presentación de las Normas Oficiales Mexicanas.

13.8 Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 1989. American Public Health Association. APHA-WWA-WPCF. 17o. Ed. Washington D.C.

13.9 Vanderzant F., Carland S. y Don F. 1992. Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. American Public Health Association. Washington, D.C.

14. Observancia de la norma

La vigilancia del cumplimiento de la presente norma corresponde a la Secretaría de Salud.

15. Vigencia

La presente Norma Oficial Mexicana entrará en vigor con su carácter de obligatorio a los 30 días siguientes a partir de su publicación en el Diario Oficial de la Federación.

Sufragio Efectivo. No Reelección.

México, D.F., a 10 de mayo de 1995.- El Director General, José Meljem Moctezuma.- Rúbrica.


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