DOF: 15/08/1994
Diario Oficial de la Federacion de 1994

PROYECTO de Norma Oficial Mexicana NOM-114-SSA1-1994, Bienes y servicios. Método para la determinación de salmonella en alimentos.

Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretaría de Salud.- Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario.

MERCEDES JUAN LOPEZ, Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, con fundamento en el artículo 39 de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal; 3 fracción XXII, 13, 194 fracción I, 197, 401 Bis, 401 Bis 1, 401 Bis 2 de la Ley General de Salud; 3 fracción XI, 38 fracción II, 40 fracción I, VI, VIII, XI, XIII; 41, 43, 44, 45, 47, 50, 53 de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización y los aplicables del Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades, Establecimientos, Productos y Servicios; y 13 fracción I del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud me permito ordenar la publicación en el Diario Oficial de la Federación del proyecto de Norma Oficial Mexicana NOM-114-SSA1-1994, Bienes y Servicios. Método para la Determinación de Salmonella en Alimentos.

El presente proyecto de Norma Oficial Mexicana se publica a efecto de que los interesados dentro de los siguientes 90 días naturales, contados a partir de la fecha de su publicación presenten sus comentarios ante el Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, sito en Lieja número 7, 1er. piso, colonia Juárez, código postal 06696, México,D.F.

Durante el plazo mencionado, los análisis que sirvieron de base para la elaboración del proyecto de Norma estarán a disposición del público para su consulta en el domicilio del Comité.

México, D.F., a 26 de mayo de 1994.

PREFACIO

En la elaboración de esta Norma participaron los siguientes Organismos e Instituciones:

SECRETARIA DE SALUD

Laboratorio Nacional de Salud Pública

Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios

SECRETARIA DE PESCA

Instituto Nacional de Pesca

SECRETARIA DE AGRICULTURA Y RECURSOS HIDRAULICOS

Comisión Nacional del Agua

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

INDUSTRIAS VINICOLAS PEDRO DOMECQ

JUGOS DEL VALLE, S.A DE C.V.

LABORATORIO FERMI, S.A.

LABORATORIO ICCABI, S.A DE C.V.

LECHE INDUSTRIALIZADA CONASUPO, S.A DE C.V

SIGMA ALIMENTOS, S.A DE C.V.

SOCIEDAD MEXICANA DE NORMALIZACION Y CERTIFICACION, S.C

INDICE

 0             INTRODUCCION

 1             OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACION

 2             FUNDAMENTO

 3             REFERENCIAS

 4             DEFINICIONES

 5             SIMBOLOS Y ABREVIATURAS

 6             REACTIVOS Y MATERIALES

 7             EQUIPO

 8             PROCEDIMIENTO

 9             CALCULO Y EXPRESION DE RESULTADOS

10           OBSERVANCIA DE LA NORMA

11           CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES

12           BIBLIOGRAFIA

13           APENDICE INFORMATIVO

            APENDICE A

0 INTRODUCCION

Los miembros del género Salmonella han sido estudiados como patógenos de origen alimentario. El control de este microorganismo, tanto por parte de las autoridades sanitarias como en las plantas procesadoras de alimentos, depende en cierta medida del método analítico para su detección.

Este microorganismo fue inicialmente identificado en muestras clínicas y los métodos empleados para estos casos se adaptaron posteriormente para su detección en alimentos. Las modificaciones a los métodos consideraron dos aspectos principales, el primero es el debilitamiento o daño a las células bacterianas presentes en un alimento, debido al proceso a que está sujeto (por ejemplo: tratamiento térmico, secado, etc) y segundo, la variabilidad inherente a la naturaleza del producto bajo estudio.

El examen de varios tipos de alimentos para el aislamiento de Salmonella frecuentemente requiere el uso de diferentes métodos. Muchos de los métodos son esencialmente similares en principio y emplean las etapas de preenriquecimiento, enriquecimiento selectivo, aislamiento en medios de cultivo selectivos y diferenciales, identificación bioquímica y confirmación serológica de los microorganismos.

1 OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACION

1.1 Esta Norma Oficial Mexicana establece un método general para la determinación de Salmonella en alimentos.

1.2 Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el Territorio Nacional para las personas físicas y morales que requieran aplicar este método en alimentos nacionales y de importación.

2 FUNDAMENTO

La presente técnica para la detección de Salmonella en alimentos, describe un esquema general que consiste de 5 pasos básicos:

2.1 Preenriquecimiento, es el paso donde la muestra es enriquecida en un medio nutritivo no selectivo, que permite restaurar las células de Salmonella dañadas a una condición fisiológica estable.

2.2 Enriquecimiento selectivo, empleado con el propósito de incrementar las poblaciones de Salmonella e inhibir otros organismos presentes en la muestra.

2.3 Selección en medios sólidos, en este paso se utilizan medios selectivos que restringen el crecimiento de otros géneros diferentes a Salmonella y permite el reconocimiento visual de colonias sospechosas.

2.4 Identificación bioquímica, este paso permite la identificación genérica de los cultivos de Salmonella y la eliminación de cultivos sospechosos falsos.

2.5. Serotipificación, es una técnica serológica que permite la identificación específica de un cultivo.

3 REFERENCIAS

Esta Norma se complementa con las siguientes Normas Oficiales Mexicanas:

NOM-SCFI-008-1993   Sistema General de Unidades de Medida

NOM-109-SSA1-1994  Procedimiento para la Toma, Manejo y Transporte de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.*

4 DEFINICIONES

Para fines de esta Norma se entiende por:

4.1 Detección de Salmonella: determinación de la presencia o ausencia de estos microorganismos en una masa determinada de producto, cuando las pruebas se llevan a cabo de acuerdo con esta Norma.

4.2 Salmonella: microorganismos que forman colonias típicas en medios selectivos sólidos y que presentan además las características bioquímicas y serológicas descritas cuando los procedimientos se efectúan de acuerdo con esta Norma.

* Proyecto de NOM en proceso de publicación.

5 SIMBOLOS Y ABREVIATURAS

Cuando en esta Norma se haga referencia a las siguientes abreviaturas, se entiende por:

g                   gramos

°C                 grados celsius

l                     litros

ml                 mililitros

cm                centímetros

mm              milímetros

min               minutos

h                   hora

±                   más, menos

p. ejem.       por ejemplo

N                   Normal

6 REACTIVOS Y MATERIALES

En caso de disponerse de fórmulas comerciales deshidratadas, se deben seguir las instrucciones para su preparación, impresas en la etiqueta respectiva.

Las sustancias químicas usadas para preparar los medios de cultivo y los reactivos deben ser grado analítico.

6.1 Reactivos

6.1.1 Medios de pre-enriquecimiento

6.1.1.1 Agua de peptona tamponada

Fórmula

Peptona                                                              10                g

Cloruro sódico                                                    5                g

Fosfato sódico dibásico                                    3,5             g

Fosfato potásico monobásico                         1,5             g

Agua                                                                      1                l

Preparación

Disolver los componentes en agua, calentando si es necesario.

Ajustar el pH, si es necesario, después de la esterilización a 7,0

Distribuir en recipientes de vidrio esterilizables con la capacidad necesaria para obtener las porciones necesarias para la prueba.

Esterilizar por 20 min a 121 ± 1°C

6.1.1.2 Caldo lactosado

Fórmula

Extracto de carne                                                3                g

Peptona                                                                5                g

Lactosa                                                                 5                g

Agua destilada                                                    1                l

pH final: 6,9 ± 0,2

Preparación

Disolver los ingredientes en agua, calentando a 65°C.

Distribuir en porciones de 225 ml, en frascos de 500 ml.

Esterilizar durante 15 min a 121°C

6.1.2 Caldo de enriquecimiento

6.1.2.1 Caldo selenito-cistina

Fórmula

Triptona o polipeptona                                      5                g

Lactosa                                                                 4                g

Fosfato disódico                                               10                g

Selenito ácido de sodio                                    4                g

L-cistina                                                                0,01          g

Agua destilada                                                    1                l

pH final: 7,0 ± 0,2 a 25°C

Preparación

Disolver los ingredientes en un litro de agua destilada estéril y distribuir en volúmenes de 10 y 225 ml en recipientes estériles, según se requiera.

El caldo así preparado es transparente e incoloro. De preferencia úsese el mismo día de su preparación.

Si se desea conservar el medio por varios días, puede exponerse al calor en autoclave por 5 min a 110°C, tomando entonces un color salmón.

6.1.2.2 Caldo tetrationato

Fórmula

Proteosa peptona o triptona                             5                g

Sales biliares                                                      1                g

Carbonato de calcio                                        10                g

Tiosulfato de sodio pentahidratado             30                g

Agua destilada                                                    1                l

pH final: 7,0 ± 0,1

Preparación

Disolver los ingredientes en un litro de agua destilada estéril.

Distribuir, agitando constantemente, en porciones de 10 y 225 ml, en recipientes estériles. Guardar en refrigeración.

Antes de usar el medio, agregar 2 ml de una solución yodo-yoduro y 1 ml de solución de verde brillante al 0,1% por cada 100 ml de caldo. El medio una vez adicionado de yodo no debe calentarse y debe usarse el mismo día de su preparación.

6.1.2.3 Vassiliadis-Rappaport

Fórmula

Solución A

Triptona                                                                5,0             g

Cloruro de sodio                                                 8,0             g

Fosfato de potasio dihidrogenado                  1,6             g

Agua destilada                                                    1                l

Disolver los componentes en agua por calentamiento cercano a 70°C

Solución B

Cloruro de magnesio hexahidratado         400,0             g

Agua destilada                                                    1                l

Disolver el cloruro de magnesio en agua

Como esta sal es muy higroscópica es conveniente disolver el contenido entero de cloruro de magnesio desde un recipiente recientemente abierto de tal modo que la concentración de la solución sea de 0,4 g/ml

Conservar en frasco ámbar a temperatura ambiente

Solución C

Oxalato de verde de malaquita                        0,4             g

Agua destilada                                               100,0             ml

Disolver el oxalato de verde de malaquita en agua

Conservar en frasco ámbar a temperatura ambiente

Medio completo

solución A                                                            1 000        ml

solución B                                                       100                ml

solución C                                                         10                ml

Preparación

Adicionar 1 000 ml de la solución A, 100 ml de la solución B y 10 ml de la solución C.

Ajustar el pH si es necesario, de tal manera que después de la esterilización sea de 5,2

Distribuir antes de usar dentro de tubos en cantidades de 10 ml

Almacenar en refrigeración.

6.1.2.4 Caldo de Soya Tripticasa

Fórmula

Tripticasa o triptosa                                         17,0          g

Fitona                                                                    3,0          g

Glucosa                                                                2,5          g

Cloruro de sodio                                                 2,5          g

Agua destilada                                                    1               l

pH final: 7,3 ± 0,2

Preparación

Disolver los ingredientes en 1 litro de agua destilada, calentando lentamente hasta su disolución completa.

Distribuir porciones de 225 ml dentro de matraces de 500 ml y esterilizar en autoclave durante 15 min a 121°C.

6.1.2.5 Leche descremada reconstituida

Suspender 100 g de leche descremada en polvo en un litro de agua destilada. Agitar circularmente hasta disolución. Distribuir en volúmenes de 225 ml en matraces Erlenmeyer de 500 ml. Esterilizar a 121 °C por 15 minutos. El volumen final debe corregirse para mantener 225 ml.

6.1.2.6 Caldo soya tripticasa estéril adicionado con sulfito de potasio.

Adicionar al caldo soya tripticasa 5 g de sulfito de potasio por cada 1000 ml de medio, quedando una concentración final de sulfito de potasio del 0,5%. Adicionar el sulfito de potasio antes de esterilizar en autoclave en la forma habitual.

6.1.3 Medios de aislamiento

6.1.3.1 Agar verde brillante (VB)

Fórmula

Extracto de levadura                                           3              g

Polipeptona (Proteosa peptona No. 3)        10              g

Cloruro de sodio                                                 5              g

Lactosa                                                              10              g

Sacarosa                                                           10              g

Rojo de fenol                                                       0,08        g

Agar                                                                     20              g

Verde brillante                                                     0,0125   g

Agua destilada                                                    1               l

pH final: 6,9 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en un litro de agua destilada y calentar a ebullición, hasta disolución completa. Ajustar el pH.

Esterilizar en autoclave por 12 min a 121°C. El sobrecalentamiento del medio disminuye su selectividad

Enfriar el medio a 50°C y distribuirlo en cajas de petri estériles. El aspecto del medio es obscuro, de color marrón.

6.1.3.2 Agar con sulfito de bismuto

Fórmula

Extracto de carne de res                                   5              g

Mezcla de peptonas                                         10              g

Glucosa                                                               5              g

Fosfato disódico (anhidro)                               5              g

Sulfato ferroso (anhidro)                                   0,3          g

Sulfito de bismuto                                              8              g

Verde brillante                                                     0,025      g

Agar                                                                     20              g

Agua destilada                                                    1               l

pH final: 7,6 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en un litro de agua. Calentar hasta su disolución completa, agitando frecuentemente. Ajustar el pH.

Enfriar a 45°C y verter en cajas de petri estériles, distribuyendo de manera homogénea el precipitado propio del medio.

El aspecto de las placas es opaco, de color verde pálido y deben usarse el mismo día de su preparación. Si la coloración es parda, no deben utilizarse.

El medio no debe esterilizarse en autoclave; el sobrecalentamiento afecta su selectividad.

6.1.3.3 Agar xilosa lisina desoxicolato (XLD)

Fórmula

Xilosa                                                                    3,75        g

L-lisina                                                                  5,00        g

Lactosa                                                                 7,50        g

Sacarosa                                                              7,50        g

Cloruro de sodio                                                 5,00        g

Extracto de levadura                                           3,00        g

Rojo de fenol                                                       0,08        g

Agar                                                                     15,00        g

Desoxicolato de sodio                                       2,50        g

Citrato férrico-amónico                                      0,80        g

Tiosulfato de sodio                                            6,80        g

Agua destilada                                                    1               l

pH final: 6,9 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en un litro de agua destilada, y calentar en baño de agua a 55°C, agitando frecuentemente, hasta disolución completa. Ajustar el pH.

Enfriar a 50°C y verter en cajas de petri estériles. No se esterilice.

El sobrecalentamiento produce una precipitación; la reactividad del medio puede ser satisfactoria, pero las colonias suelen ser muy pequeñas.

El aspecto del medio es claro y de color rojo brillante.

6.1.3.4 Agar para Salmonella y Shigella (SS)

Fórmula

Extracto de carne                                                5                g

Polipeptona *                                                       5                g

Lactosa                                                              10                g

Sales biliares                                                      8,5             g

Citrato de sodio dihidratado                             8,5             g

Tiosulfato de sodio pentahidratado                8,5             g

Citrato férrico                                                       1                g

Agar                                                                     13,5             g

Rojo neutro                                                          0,025        g

Verde brillante                                                     0,33          mg

Agua destilada                                                    1                l

pH final: 7,0 ± 0,2

* La polipeptona se puede sustituir por 2,5 g de peptona de caseína y 2,5 g de peptona de carne.

Preparación

Suspender los ingredientes en un litro de agua destilada estéril y calentar a ebullición hasta disolución completa. Ajustar el pH. No esterilizar en autoclave.

Enfriar a 50°C y distribuir en cajas de petri estériles en condiciones asépticas.

El aspecto del medio fundido es claro y de color rosado.

6.1.4 Medios para pruebas bioquímicas

6.1.4.1 Agar de tres azúcares y hierro (TSI)

Fórmula

Peptona de carne *                                            1,0          g

Peptona de caseína *                                        1,0          g

Cloruro de sodio                                                 0,5          g

Lactosa                                                                 1,0          g

Sacarosa                                                              1,0          g

Glucosa                                                                0,1          g

Agar                                                                       1,3          g

Rojo de fenol                                                       2,5       mg

Sulfato ferroso amónico

pentahidratado                                                 20          mg

Tiosulfato de sodio                                          20          mg

Agua destilada                                               100           ml

pH final: 7,3 ± 0,2

* Estas peptonas se pueden sustituir por 2 g de polipeptona.

Preparación

Suspender los ingredientes en 100 ml de agua destilada. Calentar a ebullición, agitando ocasionalmente, hasta disolución completa.

Enfriar a 60°C y ajustar el pH.

Distribuir en volúmenes de 3 ml en tubos de 13 x 100 mm y esterilizar a 121°C durante 15 min. Inclinar los tubos de manera que el medio de cultivo en el fondo alcance una altura de 3 cm y una profundidad de 4 cm. El medio es de color rojo.

6.1.4.2 Agar de hierro y lisina (LIA)

Fórmula

Peptona de gelatina                                           0,5          g

Extracto de levadura                                           0,3          g

Glucosa                                                                0,1          g

L-lisina                                                                  1,0          g

Citrato férrico-amónico                                   50          mg

Tiosulfato de sodio anhidro                             4          mg

Púrpura de bromocresol                                   2          mg

Agar                                                                       1,5          g

Agua destilada                                               100           ml

pH final: 6,7 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en el agua destilada y mezclar bien, calentar hasta ebullición con agitación frecuente hasta conseguir la disolución completa. Ajustar el pH.

Distribuir en volúmenes de 3 ml en tubos de 13 x 100 mm, con tapón de rosca.

Esterilizar en autoclave a 121°C durante 12 min. Dejar que los tubos se enfríen en posición inclinada, de tal modo que se obtengan columnas de medio de 4 cm y una superficie inclinada de 2 cm.

El medio ya preparado es de color púrpura.

6.1.4.3 Agar nutritivo

Fórmula

Extracto de carne                                                3              g

Peptona                                                                5              g

Agar                                                                     15              g

Agua destilada                                                    1               l

pH final: 6,8 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en agua. Dejar reposar de 5 a 10 min.

Calentar a ebullición hasta disolución completa. Distribuir en tubos de 13 x 100 mm, en cantidades de 1/3 de su volumen.

Esterilizar a 12°C por 15 min. Inclinar los tubos antes que el agar solidifique.

6.1.4.4 Medio de SIM (para Sulfuro, Indol y Movilidad)

Fórmula

Extracto de carne                                                3              g

Peptona                                                              30              g

Hierro peptonizado                                             0,2          g

Tiosulfato de sodio                                            0,025      g

Agua destilada                                                    1               l

pH final: 7,3 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en el agua destilada, calentar a ebullición agitando frecuentemente hasta lograr una disolución completa.

Enfriar a 50°C y ajustar el pH.

Distribuir el medio en volúmenes de 3 ml en tubos de 13 x 100 mm y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 min. Se dejan enfriar los tubos en posición vertical.

6.1.4.5 Agar citrato de Simmons

Fórmula

Fosfato de amonio                                             1              g

Fosfato dipotásico                                              1              g

Cloruro de sodio                                                 5              g

Citrato de sodio                                                  2              g

Sulfato de magnesio                                         0,20        g

Azul de bromotimol                                            0,08        g

Agar                                                                     15              g

Agua destilada                                                    1               l

pH final: 6,8 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en el agua destilada, calentar a ebullición agitando frecuentemente hasta lograr una disolución completa.

Ajustar el pH

Distribuir el medio en volúmenes de 3 ml en tubos de 13 x 100 mm y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 min.

Dejar enfriar los tubos en posición inclinada.

6.1.4.6 Caldo MR-VP (Rojo de metilo-Voges Proskauer)

Fórmula

Peptona                                                                7              g

Dextrosa                                                               5              g

Difosfato de potasio                                           5              g

Agua destilada                                                    1               l

pH final: 6,9 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en el agua destilada, calentar a ebullición agitando frecuentemente hasta lograr una disolución completa.

Ajustar el pH

Distribuir el medio en volúmenes de 3 ml en tubos de 13 x 100 mm y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 min.

6.1.4.7 Caldo manitol

Fórmula

Extracto de carne                                                1,0          g

Proteosa peptona                                            10,0          g

Cloruro de sodio                                                5,0          g

Rojo de fenol                                                       0,018      g

Manitol                                                                10,0          g

Agua                                                                      1               l

pH final: 7,4 ± 0,2

Preparación

Suspender 26 g del medio deshidratado en un litro de agua, mezclar y ajustar el pH

Distribuir en volúmenes de 2 a 3 ml en tubos de 13 X 100 mm

Esterilizar a 121°C durante 15 min

6.1.4.8 Caldo malonato

Fórmula

Extracto de levadura                                           1,0          g

Sulfato de amonio                                              2,0          g

Fosfato dipotásico                                              0,6          g

Fosfato monopotásico                                      0,4          g

Cloruro de sodio                                                 2,0          g

Malonato                                                               3,0          g

Glucosa                                                                0,25        g

Azul de bromotimol                                            0,025      g

Agua                                                                      1               l

pH final: 6,7 ± 0,2

Preparación

Suspender 9,275 g del medio deshidratado en un litro de agua, mezclar y ajustar el pH.

Distribuir en tubos de 13 X 100 mm en cantidades de 3 ml.

Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 min.

6.1.4.9 Caldo Urea

Fórmula

Urea                                                                    20,0          g

Extracto de levadura                                           0,1          g

Fosfato monopotásico                                      9,1          g

Fosfato disódico                                                 9,5          g

Rojo de fenol                                                       0,01        g

Agua                                                                      1               l

pH final: 6,8 ± 0,2

Preparación

Disolver los ingredientes en agua destilada.

NO CALENTAR. Esterilizar por filtración a través de membrana 0,45 micrómetros.

Distribuir asépticamente de 1,5 a 3 ml en tubos estériles de 13 X 100 mm.

6.1.4.10 Caldo de urea rápido

Fórmula

Urea                                                                    20,0          g

Extracto de levadura                                           0,1          g

Fosfato monopotásico                                      0,091      g

Fosfato disódico                                                 0,095      g

Rojo de fenol                                                       0,01       g

Agua                                                                      1               l

pH final: 6,8 ± 0,2

Preparación

Disolver los ingredientes en agua destilada.

NO CALENTAR. Esterilizar por filtración a través de membrana 0,45 micrómetros.

Distribuir asépticamente de 1,5 a 3 ml en tubos estériles de 13 X 100 mm.

6.1.4.11 Caldo infusión cerebro corazón

Fórmula

Infusión cerebro corazón                              200,0          g

Infusión de corazón de res                          250,0          g

Proteosa peptona                                            10,0          g

Cloruro de sodio                                                 5,0          g

Fosfato disódico dodecahidratado                 2,5          g

Dextrosa                                                               2,0          g

Agua destilada                                                    1               l

pH final: 7,4 ± 0,2

Preparación

Disolver los ingredientes en agua destilada, calentar suavemente.

Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 min.

6.1.5 Soluciones

6.1.5.1 Solución verde brillante al 0,1% (1:1000)

Verde brillante                                                     0,1          g

Agua destilada estéril                                   100           ml

Disolver 0,1 g en agua destilada estéril hasta completar 100 ml.

6.1.5.2 Solución de yodo-yoduro

Cristales de yodo                                               6              g

Yoduro de potasio                                              6              g

Agua destilada                                               100           ml

Disolver los cristales y el yoduro de potasio en agua destilada hasta completar 100 ml.

Conservar en frasco ámbar

6.1.5.3 Solución salina al 0,85%

Cloruro de sodio                                                 0,85        g

Agua destilada                                               100           ml

Disolver el cloruro de sodio en el agua y esterilizar a 121°C durante 15 min.

6.1.5.4 Solución salina formalizada

Solución de formaldehído (36-38%)              6,0        ml

Cloruro de sodio                                                 8,5          g

Agua destilada                                                    1               l

Disolver 8,5 g de cloruro de sodio en 1 litro de agua destilada. Esterilizar a 121°C durante 15 min.

Enfriar a temperatura ambiente. Adicionar 6 ml de la solución de formaldehído. No esterilizar después de la adición de formaldehído.

6.1.5.5 Reactivo de Kovac

p-dimetil-aminobenzaldehído                          5              g

Alcohol amílico                                                 75           ml

Acido clorhídrico concentrado                       25           ml

Disolver el p-dimetil-aminobenzaldehído en el alcohol amílico y después agregar el ácido clorhídrico lentamente. Conservar en frasco ámbar en refrigeración.

6.1.5.6 Solución de alfa-naftol al 5%

Alfa-naftol                                                             5              g

Alcohol                                                             100           ml

Disolver 5 g de alfa-naftol en alcohol hasta completar 100 ml.

6.1.5.7 Solución de rojo de metilo

Rojo de metilo                                                     0,10        g

Alcohol etílico                                                  300           ml

agua destilada c.b.p                                      500           ml

Disolver el rojo de metilo en el alcohol etílico y adicionar agua hasta completar 500 ml.

6.1.5.8 Solución de hidróxido de potasio al 40%

Hidróxido de potasio                                       40              g

Agua destilada                                               100           ml

Disolver 40 g de hidróxido de potasio en agua hasta completar 100 ml.

6.1.6 Antisueros

Antisuero polivalente somático (O)

Antisuero polivalente flagelar (H)

Antisuero Vi

6.2 Material

Matraces Erlenmeyer de 500 ml

Recipientes de boca ancha, de capacidad apropiada para contener las muestras simples y compuestas

Angulos de vidrio

Cucharas, bisturís, cuchillos y pinzas

Tubos de ensaye de 16 x 150 mm y de 20 x 100 mm

Tubos para serología de 10 x 75 mm o de 13 x 100 mm

Pipetas bacteriológicas de 10,0 y 5,0 ml, graduadas en 0,1 ml y protegidas con tapón de algodón.

Pipetas de 1 ml, con graduaciones de 0,01 ml

Cajas de Petri estériles de vidrio o desechables

Rejillas para tubos de ensaye

Asa de platino o nicromel de aproximadamente 3 mm de diámetro

Papel pH (intervalo de 6-8) con graduaciones máximas de 0.4 unidades de pH para cambios de color

Todo el material que tenga contacto con las muestras bajo estudio debe esterilizarse mediante:

Horno, durante 2 horas a 170-175°C

Autoclave, durante 15 minutos como mínimo a 121 ± 1°C

7 EQUIPO

Horno para esterilizar que alcance los 180 °C

Incubadora con termostato para evitar variaciones mayores de ± 0,1°C y termómetro.

Autoclave con termómetro o manómetro, probado con termómetro de máximas.

Baño maría con termostato y termómetro.

Balanza granataria con sensibilidad de 0,1 g

Licuadora de una o dos velocidades controladas por un reóstato, con vasos esterilizables (Pyrex o aluminio).

Mecheros Bunsen o Fisher

Potenciómetro

8 PROCEDIMIENTO

8.1    Preparación de los alimentos para el aislamiento de Salmonella

Los siguientes métodos se basan en el análisis de 25 g de la muestra analítica en una proporción de 1:9 de muestra/ caldo. Esta cantidad puede variarse siempre que se mantenga la misma proporción. Se recomienda una muestra de 25 g o más.

8.1.1. Procedimiento general para la preparación de muestras

Pesar asépticamente 25 gramos de la muestra en un vaso estéril de licuadora. Adicionar 225 ml del medio de preenriquecimiento estéril (generalmente caldo lactosado, a menos que se indique otro) y licuar durante un min. Tranferir asépticamente la mezcla homogeneizada a un recipiente estéril de boca ancha con tapón de rosca y dejar reposar por 60 min a temperatura ambiente con la tapa bien enroscada. Mezclar bien y determinar el pH aproximado con papel pH. Ajustar, si es necesario, a un pH 6,8 ± 0,2 con hidróxido de sodio 1N o ácido clorhídrico 1N estériles. Mezclar y cubrir el recipiente enroscando suavemente la tapa.

Incubar 24 ± 2 h a 35 °C. Continuar como se indica en 8.2.1.

8.1.2 Procedimiento específico para la preparación de muestra según el producto.

8.1.2.1 Huevo en polvo, claras de huevo en polvo, huevos líquidos pasteurizados y congelados, fórmulas infantiles y mezclas preparadas en polvo (harinas para hot cakes, galletas, donas, bisquets y pan).

De preferencia no descongelar la muestra. Si se requiere, preparar los alimentos congelados justo antes de tomar la muestra analítica descongelándolos a 45 °C por 15 min aproximadamente con agitación constante en un baño de agua o por 18 h a una temperatura entre 2- 5 °C. Los productos que no son en polvo se trabajan como indica el procedimiento general (8.1.1). Para los productos en polvo, pesar los 25 g de muestra analítica y adicionar cantidades de 15 ml de caldo lactosado, homogeneizando poco a poco con una varilla de vidrio estéril u otra herramienta también estéril, agregar caldo hasta completar 225 ml. Continuar igual que el procedimiento general.

8.1.2.2 Productos no pasteurizados congelados de huevo.

Descongelar la muestra como se indica en 8.1.2.1 pesar asépticamente y por duplicado 25 g de muestra. Colocar en un matraz con 225 ml de caldo selenito cistina una de las muestras y la otra en un matraz con 225 ml de caldo tetrationato, sin verde brillante. Proceder como en 8.1.1 hasta ajustar el pH. Adicionar 2,25 ml de verde brillante al 0,1 % y 4,5 ml de solución yodo-yoduro a la muestra contenida en el caldo tetrationato y mezclar bien. Incubar como se indica en 8.2.2

8.1.2.3 Productos que contienen huevo en su formulación (pastas para sopa, rollos chinos, etc.); ensaladas preparadas (jamón, huevos, pollo, atún, pavo); frutas frescas, congeladas o secas; crustáceos (camarones, cangrejos, jaibas, langostinos, langostas) y pescado.

Preferentemente no descongelar la muestra antes de su análisis, si esto es necesario, proceder igual que en 8.1.2.1 utilizando caldo lactosado como medio de preenriquecimiento, licuar dos min. Continuar después de la incubación como en 8.2.1

8.1.2.4 Leche en polvo, entera, semidescremada o descremada.

Seguir el procedimiento general para el pesado de la muestra y adicionarla lentamente a un matraz Erlenmeyer con 225 ml de agua- verde brillante, procurando que el polvo quede en la superficie del líquido y se hidrate suavemente. Dejar la mezcla en reposo por 60 min, e incubar como se indica en 8.1.1

8.1.2.5 Queso.

Proceder igual que en 8.1.1 utilizando agua de peptona tamponada como medio de preenriquecimiento.

8.1.2.6 Caseína.

Seguir el procedimiento señalado en 8.1.1, licuar por dos minutos y ajustar cuidadosamente el pH.

8.1.2.7 Coco.

Proceder como se indica en 8.1.1 hasta ajustar, si es necesario, el pH a los valores indicados. Adicionar hasta un máximo de 2,25 ml de Tergitol aniónico 7 estéril (121°C/15 min) y mezclar bien. Puede utilizarse Tritón X- 100 estéril. Usar la cantidad necesaria de estos detergentes utilizando el volumen mínimo para que se inicie la formación de espuma. Puede ser, para el Tritón X-100 de dos a tres gotas. Incubar como se indica en 8.1.1.

8.1.2.8 Levadura seca.

Seguir el procedimiento de 8.1.1, utilizando como medio de enriquecimiento caldo soya tripticasa estéril. Mezclar para formar una suspensión homogénea. Ajustar el pH y terminar el procedimiento como en 8.1.1.

Para levadura seca inactiva, continuar como en 8.2.1. Para levadura seca activa, mezclar la muestra incubada y transferir 1 ml a cada tubo de 10 ml de caldo tetrationato y 10 ml de caldo lauril triptosa. Incubar los medios selectivos por 24 ± 2h. Continuar como se indica en 8.2.2.

8.1.2.9 Carnes, sustitutos de carnes, derivados cárnicos, sustancias de origen animal, productos glandulares y harinas (pescado, carne y hueso).

8.1.2.9.1 Productos procesados térmicamente y productos secos. Se sigue el procedimiento señalado en 8.1.1 hasta la homogenización. Si la muestra es en polvo o molida, el licuado puede omitirse. Después de reposar, mezclar bien y ajustar el pH como se indica en el procedimiento general. Para emulsionar las grasas, agregar los detergentes en las mismas proporciones y con las mismas recomendaciones que para el coco. La cantidad de los mismos dependerá en gran medida de la composición del alimento. Los detergentes no serán necesarios en los productos glandulares en polvo. Incubar las muestras como se indica en 8.1.1.

8.1.2.9.2 Productos crudos o altamente contaminados. Pesar porciones de 25 g de producto en dos vasos para licuadora. Si la muestra es en polvo o molida, el licuado puede omitirse y el producto puede pesarse directamente en matraces Erlenmeyer estériles de 500 ml. Adicionar 225 ml de caldo selenito cistina o 225 ml de caldo tetrationato (sin verde brillante) a cada muestra analítica. Licuar por 2 minutos y pasar asépticamente a matraces Erlenmeyer de 500 ml. Dejar reposar y ajustar el pH como se indica en 8.1.1.

Adicionar 2,25 ml de solución de verde brillante 0,1% y 4,5 ml de solución yodo-yoduro a la muestra que se enriquecerá con caldo tetrationato. Homogenizar e incubar. Continuar como se indica en 8.2.1.

8.1.2.10 Dulces y dulces cubiertos (incluyendo chocolate).

Pesar asépticamente 25 g de la muestra en un vaso para licuadora agregando 225 ml de leche descremada reconstituida. Licuar por dos minutos. Manejar igual que en 8.1.1 hasta después de ajustar el pH. Adicionar 0,45 ml de solución al 1% de verde brillante y mezclar bien. Incubar como se indica en 8.1.1.

8.1.2.11 Especias.

8.1.2.11.1 Pimienta negra, pimienta blanca, semilla de apio, comino, perejil seco, romero, tomillo, chile en polvo, paprika o pimentón, ajonjolí, hojuelas de vegetales (vegetales secos).

Pesar asépticamente 25 g de la muestra y verter en un recipiente de tapón de rosca de 500 ml con 225 ml de caldo soya tripticasa estéril y mezclar bien. Continuar con el procedimiento 8.1.1

8.1.2.11.2 Ajo en polvo u hojuelas; cebolla en polvo u hojuelas.

Pesar asépticamente 25 g de la muestra y verter en un recipiente de tapón de rosca de 500 ml con 225 ml de caldo soya tripticasa estéril adicionado con sulfito de potasio y mezclar bien. Continuar con el procedimiento 8.1.1.

8.1.2.11.3 Pimienta de Jamaica (Pimienta inglesa), clavo de especia, canela y orégano.

No se conoce un método para neutralizar la toxicidad de estas cuatro especias. Diluir por lo tanto, más allá de su poder de toxicidad. Examinar la pimienta, canela y orégano en una proporción 1:100 muestra/ caldo, y el clavo a 1: 1000 muestra/ caldo. Seguir el procedimiento igual que en 8.1.2.11.1.

8.1.2.12 Gelatina

Pesar asépticamente 25 g de muestra en un recipiente de boca ancha y tapón de rosca de 500 ml. Adicionar 225 ml de caldo lactosado estéril con 5 ml de solución acuosa de gelatinasa al 5% y mezclar bien. Dejar reposar 60 min y continuar igual que el procedimiento 8.1.1

8.2 Aislamiento de Salmonella

8.2.1 Cerrar firmemente el tapón de rosca de los matraces con los cultivos de preenriquecimiento y agitar suavemente, transferir respectivamente 1 ml de la mezcla a un tubo que contenga 10 ml de caldo tetrationato y a otro con 10 ml de caldo selenito. Como alternativa, en sustitución del caldo tetrationato puede emplearse el medio Vassiliadis-Rappaport.

8.2.2 Incubar de 18 a 24 h a 35 °C o para alimentos fuertemente contaminados a 42°C por el mismo periodo. Estriar los productos que fueron directamente enriquecidos en medios selectivos.

8.2.3 Mezclar el tubo con caldo selenito cistina y estriar en agar xilosa lisina desoxicolato (XLD), agar verde brillante (VB) y una tercera caja con cualquiera de los medios selectivos adicionales (agar entérico Hektoen, agar Sulfito de Bismuto o Agar SS).

Efectuar el mismo procedimiento para el caldo tetrationato.

Incubar las placas 24 ± 2 h a 35 °C.

8.2.4 Examinar las placas para investigar la presencia de colonias típicas de Salmonella, de acuerdo con las siguientes características:

Agar XLD: colonias rosas o rojas con o sin centro negro. En algunos casos las colonias pueden aparecer completamente negras.

Agar VB: colonias rojas o rosas rodeadas por medio enrojecido; las bacterias fermentadoras de la lactosa dan colonias amarillas.

Agar entérico Hektoen: colonias verdes o azulverdes con o sin centro negro. En algunos casos las colonias pueden aparecer completamente negras.

Agar Sulfito de Bismuto: las colonias típicas de Salmonella pueden ser cafés, grises o negras; con o sin brillo metálico. Generalmente el medio circundante (halo) es café, tornándose posteriormente negro. Algunas cepas producen colonias verdes sin la formación del halo oscuro. Si las placas no muestran colonias típicas o no se observa crecimiento, incubar 24 horas adicionales.

Agar SS: colonias translúcidas, ocasionalmente opacas. Algunas colonias dan centro negro. Las colonias fermentadoras de la lactosa son rojas.

8.3 Identificación bioquímica

8.3.1 Seleccionar al menos dos colonias típicas de cada medio selectivo, que se encuentren bien aisladas.

Tocar levemente el centro de cada colonia e inocular dos tubos, uno con agar triple azúcar hierro (TSI) y otro con agar hierro lisina (LIA), por estría en la superficie inclinada y por punción en el fondo.

Incubar por 24 ± 2 h a 35 °C.

Almacenar en refrigeración de 5 a 8 °C las placas con medios selectivos por si es necesario retomar más colonias.

8.3.2 Observar el crecimiento en los tubos y considerar presuntivamente positivas para Salmonella las colonias que den las siguientes reacciones:

8.3.2.1 Agar TSI, en el fondo del tubo se observa vire del indicador debido a la fermentación de la glucosa; en la superficie del medio se observa un color rojo más intenso que el medio original debido a la no fermentación de la lactosa ni de la sacarosa. En la mayoría de los casos se observa coloración negra a lo largo de la punción debido a la producción de ácido sulfihídrico.

8.3.2.2 Agar LIA, se observa intensificación del color púrpura en todo el tubo por la descarboxilación de la lisina. Considerar negativos aquellos cultivos que produzcan claramente color amarillo en el fondo del agar. La mayoría de las cepas de Salmonella producen ácido sulfihídrico en este medio con ennegrecimiento a lo largo de la punción.

8.3.2.3 Retener todos los cultivos que muestren las reacciones características de Salmonella en los medios TSI y LIA para las pruebas adicionales, indicadas en 8.3.3.

8.3.3 Los cultivos con TSI que no parecen de Salmonella pero que presentan reacciones en LIA típicos, deben trabajarse como cultivos presuntivos positivos, ya que en estos casos, el medio LIA permitirá detectar S. arizonae y cepas atípicas de Salmonella que utilicen lactosa y/o sacarosa. Descartar solamente los cultivos que muestren reacciones atípicas en ambos medios.

8.3.4 Continuar el análisis a partir de los tubos de TSI con reacciones típicas. Si el cultivo presenta reacciones atípicas en este medio, tomar colonias adicionales de las placas de donde se obtuvo el cultivo atípico anterior y sembrar las pruebas bioquímicas nuevamente.

8.3.5 Continuar la identificación bioquímica y serológica a partir de los cultivos recuperados de TSI. Se recomienda trabajar seis cultivos por cada 25 g de unidad analítica seleccionando colonias procedentes de ambos medios de enriquecimiento.

8.3.6 Prueba de ureasa

8.3.6.1 Prueba de ureasa (convencional). Con una asa estéril, tomar crecimiento del cultivo presumiblemente positivo de cada tubo de medio TSI e inocular tubos de caldo urea. Utilizar un control de medio para comparar el vire púrpura de las reacciones positivas con el color del medio original. El medio por sí mismo puede dar vire del indicador, sin embargo no aparece desarrollo del cultivo por lo que se considera negativo. Incubar 24 ± 2h a 35 °C.

8.3.6.2 Prueba de ureasa (rápida). Tomar dos asadas de crecimiento del cultivo presumiblemente positivo de cada tubo de medio TSI e inocular tubos de caldo urea (rápida). Incubar 2 h a 37 ± 0,5°C en baño de agua.

Descartar todos los cultivos que den ureasa positiva. Retener los cultivos que den la prueba negativa (sin cambio de color del medio).

8.4 Identificación serológica

8.4.1 Ensayo de los antígenos somáticos de Salmonella (Antisuero polivalente O).

8.4.1.1 Colocar con una asa dos gotas separadas de solución salina estéril sobre un portaobjetos o en dos secciones de una placa para aglutinación. Suspender en cada una de las gotas, una porción del cultivo desarrollado en TSI.

8.4.1.2 Agregar a una de ellas una gota del antisuero polivalente somático (O) y mezclar con el canto del asa o empleando aplicadores de madera.

8.4.1.3 Agitar inclinando la lámina hacia atrás y hacia adelante durante aproximadamente un minuto. Observar bajo buena iluminación sobre un fondo oscuro.

8.4.1.4 Considerar cualquier grado de aglutinación como positiva.

La prueba positiva resulta cuando se presenta aglutinación en la gota con el cultivo y el antisuero y no aglutinación en la gota que contiene el cultivo y la solución salina.

Si se observa aglutinación en ambas gotas, la prueba no es definitiva y se debe continuar con las pruebas bioquímicas complementarias.

8.4.2 Cuando la aglutinación es positiva con el suero polivalente O, puede determinarse el subgrupo empleando antisueros para los diferentes subgrupos (los grupos B, C, D y E, suelen ser los más frecuentes).

8.4.2.1 Si la aglutinación con el antisuero O es negativa, utilizar antisuero Vi y efectuar la prueba. Si hay aglutinación con Vi calentar el cultivo a ebullición y repetir la aglutinación con el antisuero polivalente O.

8.4.2.2 Si no se cuenta con los sueros grupoespecíficos, solicitar la tipificación de la cepa al laboratorio de enterobacterias del Centro Nacional de Diagnóstico y Referencia de la Secretaría de Salud o al Laboratorio Nacional de Salud Pública.

8.4.3 Si se requiere, practicar el ensayo de los antígenos flagelares de Salmonella (Antisuero polivalente H).

8.4.3.1 Inocular el crecimiento del tubo de TSI en agar infusión de cerebro corazón e incubar de 4 a 6 h a 35 °C hasta que se observe crecimiento (para ensayo en el mismo día), o bien, en caldo soya tripticaseina e incubar por 24 ± 2h a 35 °C (para ensayo al día siguiente). Adicionar 2,5 ml de solución salina formalizada a 5 ml del cultivo en caldo o al cultivo en agar cerebro corazón (BHI).

8.4.3.2 Colocar 0,5 ml del antisuero polivalente flagelar (H) preparado en un tubo para serología (13 x 100 mm aproximadamente). Adicionar 0,5 ml del cultivo formalizado. Preparar un control de solución salina mezclando 0,5 ml de solución salina formalizada con 0,5 ml del antígeno formalizado. Incubar las mezclas en baño de agua a 48- 50 °C. Observar a intervalos de 15 minutos por espacio de una hora. Una prueba positiva es cuando se observa aglutinación en la mezcla de prueba pero no en el control. Debe interpretarse como negativa una prueba en la que ninguna de las mezclas muestre aglutinación. Cuando ambas mezclas se aglutinan, se considera la prueba inespecífica.

8.5 Pruebas bioquímicas complementarias

Cuando las pruebas serológicas o bioquímicas iniciales, dan resultados atípicos o no concluyentes, realizar las pruebas que se describen a continuación:

8.5.1 Inocular los cultivos positivos provenientes de TSI y LIA en: medio SIM, agar citrato de Simmons, caldo manitol y caldo RM-VP. Usar caldo malonato para confirmar la presencia de la especie S. arizonae.

8.5.2 Interpretar los cambios en los medios inoculados conforme lo siguiente:

8.5.2.1 Agar citrato Simmons

Inocular por estría el tubo

Incubar 96 ± 2 h a 35 ± 2°C

Prueba positiva: crecimiento acompañado de un cambio de color de verde a azul.

Prueba negativa: ausencia de crecimiento y sin cambio de color.

8.5.2.2 Medio SIM

Inocular por punción

Incubar 24 h a 35 ± 2°C

Movilidad

Prueba positiva:            crecimiento a lo largo de la punción y en el seno del medio de cultivo.

Prueba negativa:           crecimiento a lo largo de la punción exclusivamente.

Producción de ácido sulfihídrico

Prueba positiva:            desarrollo de un color negro a lo largo de la punción que puede extenderse a

                                todo el medio.

Prueba negativa:           ausencia de color negro.

Producción de indol

Adicionar al tubo con medio SIM que presente crecimiento, de 0,2 a 0,3 ml de reactivo de Kovac.

Prueba positiva: desarrollo de un anillo de color rojo.

Prueba negativa: sin cambio de color.

8.5.2.3 Caldo RM-VP

Inocular un tubo con el medio

Incubar 48 ± 2 h a 35 ± 2°C para la prueba de VP y 96 horas para la prueba RM

8.5.2.3.1 Prueba de Vogues-Proskauer (VP)

Transferir a un tubo un ml del cultivo de 48 h

Adicionar 0,6 ml de solución de alfa naftol

Adicionar 0,2 ml de solución de hidróxido de potasio 40%

Adicionar algunos cristales de creatinina (opcional)

Interpretar los resultados después de incubar 2 h a 35 ± 2°C o 4 h a temperatura ambiente

Prueba positiva: desarrollo de color rojo ladrillo

Prueba negativa: sin cambio de color

Reincubar el resto del medio RM-VP 48 h más a 35 ± 2°C

8.5.2.3.1 Prueba de rojo de metilo (RM)

Adicionar al medio de cultivo de 96 h de incubación de 2 a 3 gotas de solución de rojo de metilo

Interpretar los resultados inmediatamente

Prueba positiva: desarrollo de color rojo

Prueba negativa: desarrollo de color amarillo

8.5.2.4 Caldo malonato

Inocular un tubo conteniendo el medio

Incubar 40 ± 2 h a 35 ± 2°C

Prueba positiva: desarrollo de color azul

Prueba negativa: sin cambio de color

8.5.2.5 Caldo manitol

Inocular un tubo conteniendo el medio

Incubar 24 ± 2h a 35 ± 2°C

Prueba positiva: desarrollo de color amarillo

Prueba negativa: sin cambio de color

8.5.3 Consultar los resultados obtenidos en el cuadro 2 para la identificación de los géneros de las bacterias investigadas.

NOTA: los sistemas bioquímicos comerciales API-20, Micro-ID y Enterotube pueden ser usados como alternativa para las pruebas bioquímicas convencionales.

9 CALCULO Y EXPRESION DE RESULTADOS

9.1 Interpretación de reacciones bioquímicas y serológicas.

CUADRO 1

Reacciones bioquímicas Reacciones serológicas                           Interpretación

Típica                                         Antígeno O, Vi o H positivo              Cepas consideradas

                                             como Salmonella

Típica                                                 Todas las reacciones

                                             negativas

Típica                                         No probada                                        Puede ser Salmonella

Reacciones atípicas               Antígeno O, Vi o H positivo             

Reacciones atípicas               Todas las reacciones                      No debe ser considerada

                                             negativas                                            Salmonella

Nota: Ver apéndice informativo A

9.2 Reacciones bioquímicas y serológicas de Salmonella

CUADRO 2

           Prueba o sustrato                        Positivo                               Negativo                                Reacciona

Glucosa (TSI)                                       amarillo                                 rojo                                                 +

Lisina descarboxilasa (LIA)              púrpura                                  amarillo                                         +

H2S (TSI y LIA)                                     negro                                     no negro                                        +

Ureasa                                                  rojo-púrpura                         no hay cambio de color               -

Caldo de lisina descarboxilasa       púrpura                                  amarillo                                         +

Caldo dulcitol rojo de fenol               amarillo y/o gas                   no hay cambio de                      +b

                                                                                    color, ni gas.

Caldo KCN                                           crecimiento                           no hay crecimiento                       -

Caldo malonato                                   azul                                         no hay cambio de color             -c

Prueba de indol                                   superficie color violeta       superficie color amarillo             -

Prueba del antígeno flagelar            aglutinación                          no hay aglutinación                     +

Prueba del antígeno somático         aglutinación                          no hay aglutinación                     +

Caldo lactosa rojo fenol                     amarillo y/o gas                   no hay cambio de                       -c

                                                                                          color ni gas

Caldo sacarosa rojo fenol                 amarillo y/o gas                   no hay cambio de                         -

                                                                                          color ni gas

Prueba Voges-Proskauer                  de rosa a rojo                       no hay cambio de color               -

Prueba rojo de metilo                         rojo difuso                             amarillo difuso                             +

Citrato de Simmons                           crecimiento color azul        no hay crecimiento, no                v

                                                                                          hay cambio de color

a +, 90 % o más positivos en 1 o 2 días; -, 90 % o más negativas en 1 o 2 días; v, variable.

b La mayoría de los cultivos S. arizonae son negativos.

c La mayoría de los cultivos S. arizonae son positivos.

9.3 Informe de resultados

Informar: presencia o ausencia de Salmonella en ___________ g o _______________ ml de muestra.

10 OBSERVANCIA DE LA NORMA

La vigilancia del cumplimiento de la presente Norma corresponde a la Secretaría de Salud.

11 CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES

Esta Norma no tiene concordancia con normas internacionales.

12 BIBLIOGRAFIA

12.1 Amador L. R. y Col.1993. Manual de Laboratorio de Microbiología Sanitaria. IPN-ENCB. 2da. edición. p.p. 139-153.

12.2 Ewing, W.H. y Ewing's. 1986. Identification of Enterobacteriaceae. 4 th. Edition. Elsevier. New York.

12.3 ISO 6579. 1990. Microbiology-General guidance on methods for detection of Salmonella. International Organization for Standardization. Second edition.

12.4 Manual Difco. 1984. Medios de Cultivo Deshidratados y Reactivos para Microbiología. Difco Laboratories. Detroit Michigan USA. Décima edición. p.p. 765, 946, 1042, 1044 y 1128.

12.5 Norma Z-013/02. 1981. Guía para la Redacción, Estructuración y Presentación de las Normas Oficiales Mexicanas. Secretaría de Comercio y Fomento Industrial.

12.6 Secretaría de Salud. 1992. Manual de Técnicas y Procedimientos para Análisis Microbiológico de Leche en Polvo. México, D.F. p.p. 11-18.

12.7 Secretaría de Salud. 1989. Manual de Técnicas y Procedimientos para Análisis Microbiológico de Productos Cárnicos. México, D.F. p.p. 15-24 y 28-30.

12.8 Poelma L. P. y Silliker H. J. 1984 Salmonella; Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. Second Edition. American Public Health Association. Washington, DC. p.p. 301-328.

12.9 Official Methods of Analysis. Association of Official Analytical Chemists (AOAC). 1990. Vol. I. 15th. Edition, USA. p.p. 467-492.

12.10 Wallace H. A.; Paul L. P. and Clyde R. W. 1984. Isolation and Identification of Salmonella Species. FDA. Bacteriological Analytical Manual. Chapter 7. 6Th. Edition. p.p. 7.01-7.18.

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