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DOF: 12/02/2014
PROYECTO de Norma Oficial Mexicana PROY-NOM-201-SSA1-2013, Productos y servicios

PROYECTO de Norma Oficial Mexicana PROY-NOM-201-SSA1-2013, Productos y servicios. Agua y hielo para consumo humano, envasados y a granel. Especificaciones sanitarias.

Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretaría de Salud.

MIKEL ANDONI ARRIOLA PEÑALOSA, Comisionado Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios y Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, con fundamento en los artículos 39, de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal; 4, de la Ley Federal de Procedimiento Administrativo; 3o., fracción XXII, 13, Apartado A, fracciones I, II y IX, 116, 118, fracciones II, IV y VII, 119, fracción II, 120, 122, 194, 205 y 207, de la Ley General de Salud; 40, fracciones III, VII y XI, 41, 43, 44 y 47, fracción I, de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización; 33, del Reglamento de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización; 4o., 15, 20, 25, 30, 101, 102 y 103, del Reglamento de Control Sanitario de Productos y Servicios; 2o., fracciones I, inciso a), 12, 209, 210, 211, 213, 215, 216, 217, 220, 221, 222, 223, 224 y 1336, del Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades, Establecimientos, Productos y Servicios; 36, del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud; 3o., fracción I, incisos, b), e), i) y k) y 10, fracciones IV y VIII, del Reglamento de la Comisión Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios, he tenido a bien ordenar la publicación del
PROYECTO DE NORMA OFICIAL MEXICANA PROY-NOM-201-SSA1-2013, PRODUCTOS Y SERVICIOS.
AGUA Y HIELO PARA CONSUMO HUMANO, ENVASADOS Y A GRANEL. ESPECIFICACIONES
SANITARIAS
El presente proyecto se publica a efecto de que los interesados, dentro de los siguientes 60 días naturales, contados a partir de la fecha de su publicación presenten sus comentarios por escrito, en idioma español y con el sustento técnico suficiente ante el Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, sito en Oklahoma número 14 planta baja, colonia Nápoles, código postal 03810, México, D.F.; teléfono 50-80-52-00, extensión 1333, fax 55-11-14-99, correo electrónico rfs@cofepris.gob.mx.
Durante el plazo mencionado, los documentos que sirvieron de base para la elaboración del proyecto y la Manifestación de Impacto Regulatorio (MIR) quedan a disposición del público para su consulta, en el domicilio del Comité.
PREFACIO
En la elaboración de este Proyecto de Norma Oficial Mexicana participaron las unidades administrativas, instituciones y organismos siguientes:
SECRETARÍA DE SALUD.
Comisión Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios.
ANALYSIS AND RESEARCH LAB, S.A. DE C.V.
ASOCIACIÓN NACIONAL DE PRODUCTORES DE REFRESCOS Y AGUAS CARBONATADAS, A.C.
ASOCIACIÓN NACIONAL DE PRODUCTORES Y DISTRIBUIDORES DE AGUA PURIFICADA, A.C.
BONAFONT S.A. DE C.V.
COCA COLA DE MÉXICO.
CORPORATIVO DE SERVICIOS EN AGUA Y AMBIENTE, S.A. DE C.V.
GRUPO CENCON.
GRUPO EMBOTELLADORAS UNIDAS, S.A.B. C.V.
GRUPO PEÑAFIEL S.A. DE C.V.
LABORATORIO DE ANÁLISIS DE RIESGOS DEL D.F.
LABORATORIO DE SERVICIOS AMBIENTALES.
NESTLÉ MÉXICO S.A. DE C.V.
 
SERVICIOS PROFESIONALES QUÍMICOS BIOLÓGICOS S.A. DE C.V.
SERVICIOS DE AGUA Y DRENAJE DE MONTERREY S.A. DE C.V.
TECNOLOGÍA AMBIENTAL INTEGRAL S.A. DE C.V.
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO.
Facultad de Química.
ÍNDICE
1.     Objetivo y campo de aplicación.
2.     Referencias.
3.     Definiciones.
4.     Símbolos y abreviaturas.
5.     Disposiciones sanitarias.
6.     Control Sanitario del agua y hielo para consumo humano.
7.     Procedimiento de evaluación de la conformidad.
8.     Etiquetado.
9.     Concordancia con normas internacionales.
10.   Bibliografía.
11.   Observancia de la Norma.
12.   Vigencia.
       APÉNDICE A NORMATIVO. MÉTODOS DE PRUEBAS MICROBIOLÓGICAS.
       APÉNDICE B NORMATIVO. MÉTODOS DE PRUEBAS FISICOQUÍMICAS.
1. Objetivo y campo de aplicación
1.1 Esta Norma establece las características y especificaciones sanitarias que deben cumplir el agua y el hielo para consumo humano que se comercialice preenvasado o a granel y los establecimientos que se dediquen al proceso o importación de dichos productos.
1.2 Esta Norma es de observancia obligatoria en el Territorio Nacional para las personas físicas o morales que se dedican al proceso o importación de agua y hielo para consumo humano que se comercialicen preenvasados o a granel.
2. Referencias
Para la correcta aplicación de esta Norma, se sugiere consultar las siguientes normas oficiales o las que las sustituyan:
2.1 Norma Oficial Mexicana NOM-008-SCFI-2002, Sistema General de Unidades de Medida.
2.2 Norma Oficial Mexicana NOM-026-STPS-2008, Colores y señales de seguridad e higiene, e identificación de riesgos por fluidos conducidos en tuberías.
2.3 Norma Oficial Mexicana NOM-051-SCFI/SSA1-2010, Especificaciones generales de etiquetado para alimentos y bebidas no alcohólicas preenvasados-Información comercial y sanitaria.
2.4 Norma Oficial Mexicana NOM-251-SSA1-2009, Prácticas de higiene para el proceso de alimentos, bebidas o suplementos alimenticios.
3. Definiciones
 
Para fines de esta Norma se entiende por:
3.1 A granel: al producto que debe pesarse, medirse o contarse en presencia del consumidor por no encontrarse preenvasado al momento de su venta.
3.2 Agua para consumo humano: a toda aquella cuya ingestión no cause efectos nocivos a la salud. Se considera que no causa efectos nocivos a la salud, cuando se encuentra libre de gérmenes patógenos y de sustancias tóxicas, y cumpla, además con los requisitos que se señalan en la presente norma.
3.3 Agua tipo I: al Agua con una conductividad < 0.010 mS/m.
3.4 Agua mineral: a la que se caracteriza por: contenido de determinada sales minerales y sus proporciones relativas, obtenerse directamente de manantiales o fuentes perforadas procedentes de estratos acuíferos, en los cuales, dentro de los perímetros protegidos, deberán adoptarse las medidas para evitar que la calidad química o física del agua sufran algún tipo de contaminación, composición y calidad constante, envasarse cerca del punto de surgencia de la fuente, en condiciones que garantiza la pureza microbiológica y la composición química original en sus constituyentes esenciales, no someterse a otros tratamientos que los permitidos por esta Norma.
3.5 Área de llenado: a la zona donde se envasa y tapa el producto.
3.6 Área de producción: a la zona del establecimiento donde se realizan las operaciones para procesar agua y hielo para consumo humano.
3.7 Blanco de curva de calibración del instrumento: a la disolución del ácido usado como diluyente.
3.8 Blanco de reactivos: a la disolución que contiene todos los reactivos usados en los mismos volúmenes y concentraciones en el procesamiento de la muestra. Este blanco debe seguir los pasos de digestión y preparación de la muestra.
3.9 Blanco de reactivos fortificado: a la disolución que se prepara a partir de una alícuota del blanco de reactivos, añadiendo una alícuota de la disolución estándar concentrada "disolución madre", para dar una concentración final que produzca una absorbancia aceptable (aproximadamente 0,1) para el analito. El blanco de reactivos fortificado debe seguir el mismo esquema de digestión y preparación de la muestra.
3.10 Blanco de método: a la alícuota de agua destilada a la cual, junto a las muestras de control de calidad, de control de calidad interno y fortificada, se le sigue todo el procedimiento.
3.11 Carbono inorgánico: a los carbonatos, bicarbonatos y CO2.
3.12 Carbono orgánico: a todo aquel carbono enlazado covalentemente a moléculas orgánicas.
3.13 Carbono orgánico disuelto: a la fracción del carbono orgánico que pasa a través de filtro de fibra de vidrio con poro de 0.45 µm de diámetro.
3.14 Carbono orgánico no purgable: a la fracción de carbono orgánico remanente después de la purga mediante gas de arrastre.
3.15 Cisterna o tanque de almacenamiento: al depósito que sirve para almacenar el producto o materia prima en establecimientos o en transporte.
3.16 Compuestos orgánicos halogenados adsorbibles fijos: al grupo de parámetros analíticos que comprende a los halogenados no volátiles como las dioxinas y furanos, herbicidas clorados, bifenilos policlorados, plaguicidas clorados y semivolátiles clorados.
3.17 Compuestos orgánicos halogenados adsorbibles purgables: al grupo de parámetros analíticos que comprende a los halogenados volátiles como los halometanos, hidrocarburos clorados de bajo peso molecular y volátiles clorados.
3.18 Compuestos orgánicos no halogenados: al grupo de parámetros analíticos que comprende a los carbamatos, hidrocarburos poliaromáticos, plaguicidas fosforados, compuestos orgánicos semivolátiles no clorados, endotal, glifosato y plaguicidas derivados de la urea.
3.19 Carbono orgánico purgable: al grupo de parámetros analíticos que comprende a los compuestos orgánicos volátiles no halogenados.
3.20 Desinfección: a la reducción del número de microorganismos presentes, por medio de agentes
químicos y/o métodos físicos, a un nivel que no comprometa la inocuidad o la aptitud del alimento, bebida o suplemento alimenticio.
3.21 Espectrometría de absorción atómica: a una rama del análisis instrumental en el cual un elemento es atomizado en forma tal que permite la observación, selección y medida de su espectro de absorción.
3.22 Espectrometría de absorción atómica por flama: al método por el cual el elemento se determina mediante un espectrómetro de absorción atómica, usado en conjunto con un sistema de nebulización y una fuente de atomización.
La fuente de atomización es un quemador que utiliza diferentes mezclas de gases, las más frecuentes son aire-acetileno y óxido nitroso-acetileno.
3.23 Espectrometría de absorción atómica por horno de grafito: al método mediante el cual el elemento se determina por un espectrómetro de absorción atómica, usado en conjunto con un horno de grafito. El principio es esencialmente el mismo que en absorción atómica de aspiración directa en flama, excepto que se usa un horno en lugar de la flama para atomizar la muestra.
3.24 Espectrometría de absorción atómica por generación de hidruros: es un método similar al del vapor frío. Las muestras reaccionan en un dispositivo externo con un agente reductor, generalmente borohidruro. Los productos gaseosos de reacción se llevan a una celda de muestreo que se encuentra en el paso óptico del espectrómetro de absorción atómica, en este caso, los productos de reacción son hidruros volátiles. Estos compuestos moleculares no son capaces de dar una señal de absorción atómica, por lo tanto la celda se calienta para disociar el hidruro gaseoso en átomos libres. Cuando el hidruro gaseoso se disocia en la celda calentada en átomos libres, la absorción atómica crece y cae a medida que se crean los átomos y escapan de la celda de absorción. Se mide el máximo de absorción o altura de pico, como señal analítica. Los elementos que se pueden determinar con esta técnica son: As, Pb, Sb, Se.
3.25 Espectrometría de absorción atómica por vapor frío: al método que es otra aproximación para mejorar la sensibilidad de la absorción atómica, optimizando la eficiencia de muestreo en el quemador de pre-mezcla, en donde el mercurio se reduce químicamente al estado atómico libre haciendo reaccionar la muestra con un reductor fuerte (cloruro estanoso o borohidruro de sodio) en un recipiente de reacción cerrado. El mercurio volátil libre se arrastra del matraz de reacción burbujeando aire o nitrógeno a través de la disolución. Los átomos del mercurio que se arrastran son transportados a una celda de absorción que se coloca en el paso de luz del espectrómetro de absorción atómica. A medida que los átomos de mercurio pasan por la celda de muestreo, la absorbancia medida se incrementa indicando el aumento de concentración en el paso de luz.
3.26 Envase: a cualquier recipiente, o envoltura en el cual está contenido el producto preenvasado para su venta al consumidor.
3.27 Fuente de abastecimiento: al lugar a partir del cual se obtiene el agua como materia prima, incluye pero no limita a pozos, manantiales, entre otros, sin considerar los sistemas de abastecimiento de agua potable.
3.28 Hielo para consumo humano: al producto obtenido por congelación del agua para consumo humano.
3.29 Inocuo, a lo que no hace o causa daño a la salud.
3.30 Límite de detección, sensibilidad, y rangos de concentración: La sensibilidad del espectrómetro de absorción atómica de flama es definido como la concentración que el metal produce en una absorción del 1% (una absorbancia de aproximadamente 0.0044). El límite de detección del instrumento es definido como la concentración que produce la absorción equivalente a dos veces la magnitud de la fluctuación de fondo. La sensibilidad y el límite de detección varían de acuerdo al instrumento.
3.31 Límite máximo permisible: a la cantidad establecida de los parámetros que no se debe exceder en el producto terminado.
3.32 Limpieza: a la acción que tiene por objeto quitar la suciedad.
3.33 Lote, a la cantidad de un producto elaborado en un mismo ciclo, integrado por unidades homogéneas
e identificadas con un código específico.
3.34 Materia extraña: a la sustancia, resto o desecho orgánico o no, que se presenta en el producto, sea por contaminación o por manejo no higiénico del mismo durante su elaboración, o comercialización, considerándose entre otros: excretas, pelos de cualquier especie, huesos e insectos.
3.35 Materia prima: a todas las sustancias que se emplean en la producción o elaboración y que forman parte del producto terminado.
3.36 Material sanitario: al que no cede sustancias tóxicas a los productos, que entran en contacto con él y es de fácil limpieza y desinfección.
3.37 Métodos de prueba: a los procedimientos analíticos utilizados en el laboratorio para comprobar que un producto satisface las especificaciones que establece la Norma.
3.38 Método de adiciones estándar: al que implica la preparación de estándares en la matriz de la muestra, añadiendo cantidades conocidas de un estándar a una o más alícuotas de la muestra y que compensa los efectos de exaltación o depresión de la señal del analito, pero no corrige interferencias aditivas que causan una desviación de la línea de base y en la cual los resultados obtenidos son válidos si: La curva analítica es lineal, la forma química del analito es la misma que en la muestra, el efecto de interferencia es constante en el intervalo de trabajo, la señal se corrige por interferencia aditiva.
3.39 Muestra de control de calidad: a una muestra externa al laboratorio, que contiene una alícuota de concentración conocida del analito, cuyos valores de absorbancia deben estar comprendidos en el intervalo lineal del método.
3.40 Muestra de control de calidad Interno: a una disolución con el analito a determinar, preparada a partir de una marca o número de lote diferente al estándar utilizado en la curva de calibración.
3.41 Muestra fortificada: a la muestra a la cual se le adiciona una alícuota de concentración conocida del analito, diluida en el ácido apropiado de tal forma que la disolución resultante tenga una absorbancia dentro del intervalo lineal de la curva.
3.42 Personal: a todo aquel individuo que interviene en cualquier etapa del proceso.
3.43 Proceso: al conjunto de actividades relativas a la obtención, elaboración, fabricación, preparación, conservación, mezclado, acondicionamiento, envasado, manipulación, transporte, distribución, almacenamiento y expendio o suministro al público de los productos.
3.44 Producto preenvasado: al producto que fuera del punto de venta es colocado en un envase de cualquier naturaleza, en ausencia del consumidor final, y la cantidad de producto contenido en él no puede ser alterada a menos que el envase sea abierto o modificado perceptiblemente
3.45 Producto terminado: al producto que se ofrecerá al consumidor final, ya sea preenvasado o a granel.
3.46 Riesgo: a la probabilidad de que se desarrolle cualquier propiedad biológica, química o física que cause daño a la salud del consumidor.
3.47 Salmuera: a la solución saturada de cloruro de sodio y que puede contener aditivos.
3.48 Tratamiento: a la operación o serie de operaciones a la que es sometida el agua o el hielo durante su elaboración, con el propósito de eliminar o reducir su contaminación.
4. Símbolos y abreviaturas
4.1 Cuando en esta Norma se haga referencia a los siguientes símbolos y abreviaturas se entenderá por:
4.1.1 HCN
Ácido cianhídrico
4.1.2 HCI
Ácido clorhídrico.
4.1.3 NWRI-HPCA
Agar cuenta en placa heterotrófica del NWRI.
 
4.1.4 m-HPCA
Agar membrana cuenta de placa heterotrófica.
4.1.5 R2A
Agar Resorner ´s 2A
4.1.6 PSE
Agar Selectivo para Enterococos Pfizer.
4.1.7 ACUERDO
Acuerdo por el que se determinan los aditivos y coadyuvantes en alimentos, bebidas y suplementos alimenticios, su uso y disposiciones sanitarias.
4.1.8 ATCC
American Type Culture Collection (por sus siglas en inglés)
4.1.9 Sb
Antimonio.
4.1.10 As
Arsénico.
4.1.11 AOAC
Association of Official Analytical Chemists (por sus siglas en inglés)
4.1.12 Bq/L
Bequerel por litro.
4.1.13 Co2
Bióxido de carbono.
4.1.14 Cd
Cadmio.
4.1.15 EC
Caldo E. coli.
4.1.16 BHI
Caldo infusión cerebro corazón.
4.1.17 cm
Centímetro.
4.1.18 cm2
Centímetro cuadrado.
4.1.19 KCN
Cianuro de potasio.
4.1.20 CNCI
Cloruro de cianógeno
4.1.21 AOX
Compuestos orgánicos halogenados absorbibles
4.1.22 Co
Cobalto.
4.1.23 Cu
Cobre.
4.1.24 DGN
Dirección General de Normas.
4.1.25 SPA
Establecimientos Salud por Agua.
4.1.26 Fe
Fierro.
4.1.27 °C
Grado Celsius.
4.1.28 g
Gramo.
4.1.29 h
Hora.
4.1.30 F-
Ión fluoruro.
4.1.31 kg
Kilogramo.
4.1.32 kPa
Kilopascal
4.1.33 Ley
Ley General de Salud.
4.1.34 L
Litro.
4.1.35 ±
Más o menos.
4.1.36 >
Mayor que
4.1.37 <
Menor que.
4.1.38 Hg
Mercurio.
4.1.39 P-A
Método de presencia ausencia.
 
4.1.40 µ
Microohm.
4.1.41 µg
Microgramo.
4.1.42 µL
Microlitro.
4.1.43 µ
Micrómetro.
4.1.44 µm
Micrómetros.
4.1.45 mL
Mililitro.
4.1.46 mg
Miligramo.
4.1.47 mg/L
Miligramo por litro.
4.1.48 mm
Milímetro.
4.1.49 ms/m
MiliSiemens por metro.
4.1.50 mv
Milivolts.
4.1.51 RMV
Milivolts relativos.
4.1.52 min
Minuto.
4.1.53 M
Molar
4.1.54 MCC
Muestra de control de calidad.
4.1.55 MCI
Muestra de control de calidad interno.
4.1.56 DPD
N,N-dietil-p-difenildiamina.
4.1.57 nm
Nanómetro.
4.1.58 NWRI
National Water Research Institute (Por sus siglas en inglés)
4.1.59 No.
Número.
4.1.60 NMP
Número Más Probable.
4.1.61 ppm
Partes por millón
4.1.62 p
Peso.
4.1.63 pg
Picogramo.
4.1.64 Pt
Platino.
4.1.65 Pb
Plomo.
4.1.66 PTFE
Politerafluoroetileno.
4.1.67 %
Por ciento.
4.1.68 pH
Potencial de hidrógeno.
4.1.69 Reglamento
Reglamento de Control Sanitario de Productos y Servicios.
4.1.70 rpm
Revoluciones por minuto.
4.1.71 SPANDS
Sal trisódica del ácido 1,8-dihidroxi-2-(4- sulfofenilazo) naftalen-3,6-disulfónico.
4.1.72 FIAS
Sistemas automatizados de inyección en flujos continuos.
4.1.73 seg
Segundo.
4.1.74 Se
Selenio.
4.1.75 N
Solución normal.
 
4.1.76 ABS
Sulfonato de Aquil Benceno.
4.1.77 TFE
Tetrafluoroetileno.
4.1.78 THM
Triahalometanos.
4.1.79 mol
Unidad con que se mide la cantidad de una sustancia.
4.1.80 UFC
Unidades Formadoras de Colonias.
4.1.81 UNT
Unidades Nefelométricas de Turbiedad.
4.1.82 UV
Ultravioleta.
4.1.83 v
Volumen.
4.1.84 M-PA
Medio Pseudomonas Aeruginosa
4.1.85 M-PAC
Medio Pseudomonas Aeruginosa Compuesto
4.1.86 DRCM
Medio diferencial reforzado para clostridia   
 
5. Disposiciones sanitarias
Los establecimientos, además de cumplir con lo establecido en la Ley, el Reglamento y la Norma Oficial Mexicana NOM-251-SSA1-2009 (véase punto 2.4, del capítulo de Referencias, de esta Norma), se deberán ajustar a las siguientes disposiciones:
5.1 Agua.
5.1.1 Abastecimiento sanitario del agua. En caso de que la materia prima se obtenga directamente de una fuente de abastecimiento:
5.1.1.1 No deben construirse obras de captación en fuentes de abastecimiento cuyas cargas de contaminantes por su magnitud y peligrosidad pongan en riesgo la salud humana.
5.1.1.2 La fuente de abastecimiento y las obras de captación deben protegerse mediante separación física, con la altura o distancia suficiente que impida la deposición de desechos sólidos, líquidos o excretas y el paso de animales. Sólo se permitirá el acceso a personal autorizado.
5.1.1.3 Las tuberías, bombas y otros dispositivos que estén en contacto con el agua para consumo humano y que sean utilizados para la captación, deben ser de material sanitario.
5.1.2 Establecimientos.
5.1.2.1 Además de lo establecido en la Norma Oficial Mexicana NOM-026-STPS-2008 (véase punto 2.2, del capítulo de Referencias, de esta norma), las tuberías que conduzcan agua en distintas etapas del proceso o fluidos diferentes de ésta, se deben identificar de acuerdo con el código propio de la empresa, que debe proporcionarse durante la verificación. Cualquier forma de identificación debe ser visible para el personal.
5.1.2.2 El agua que se utilice para propósitos no relacionados con el producto, debe transportarse por tuberías diferentes, separadas, sin que haya alguna conexión ni sifonado de retroceso con las tuberías que transportan la de proceso y el agua lista para envasarse.
5.1.2.3 Las áreas de lavado y desinfección, llenado y de producción deberán contar con:
5.1.2.3.1 El área de llenado debe estar completamente aislada de las demás áreas, durante dicha operación, los accesos de recepción y salida del envase deben mantenerse cerrados o protegidos de manera que se evite la contaminación del producto.
5.1.2.3.2 Las boquillas de llenado, así como las válvulas y el maneral deben ser de material sanitario, limpiarse y desinfectarse al inicio de la operación.
5.1.2.3.3 Al paro de operaciones, el agua no debe permanecer en reposo en las tuberías. En caso de no haber un sistema que permita su desalojo, deben existir los procedimientos y sistemas para garantizar que el agua que permaneció en las tuberías regrese al principio del proceso donde se le someta a las operaciones necesarias que garanticen su inocuidad.
5.1.2.4 Las áreas de expendio deberán contar con:
5.1.2.4.1 En el caso de venta directa al consumidor de agua a granel, además de los puntos señalados anteriormente, deberá contar con un área cerrada para el lavado de garrafones y un área de llenado ubicada fuera de tránsito vehicular, en el que el dispositivo de llenado debe contar con mecanismos de cierre automático de la puerta con ajuste al marco que impida el inicio de la operación de llenado del garrafón en tanto la puerta no esté cerrada.
 
5.1.2.4.2 En caso de que el establecimiento suministre o expenda agua a granel, debe colocar letreros visibles que señalen el riesgo que representa para la salud el llenado de envases sucios o que hayan contenido sustancias tóxicas y su manejo inadecuado. Las letras deben tener un tamaño de 5 cm de altura como mínimo y ser de colores contrastantes, refiriéndose a alguno de los siguientes temas: "TRANSPORTA TUS ENVASES Y GARRAFONES BIEN TAPADOS" o "NO UTILICES ENVASES QUE HAYAN CONTENIDO SUSTANCIAS TÓXICAS" o "LAVA Y DESINFECTA TU GARRAFÓN ANTES DE LLENARLO".
5.1.3 Transporte.
5.1.3.1 Cuando se lleven a cabo las operaciones de carga y descarga, tanto para el caso de materia prima como producto terminado, las conexiones entre la cisterna, válvulas y mangueras de distribución, así como el equipo en general del transporte de agua a granel, no debe presentar fugas. Durante el recorrido las bocas de las mangueras de las cisternas deben mantenerse protegidas con dispositivos de material sanitario, a fin de evitar su contaminación con el medio ambiente.
5.1.3.2 Los medios de transporte del agua destinada al envasado no deberán ser utilizados para transportar otro tipo de agua.
5.1.3.3 El agua para consumo humano trasportada a granel no deberá ser comercializada directamente al consumidor final por este medio.
5.1.4 Condiciones sanitarias de los envases.
5.1.4.1 Las tapas deberán ser nuevas de material inocuo y lavarse previamente a su utilización. En caso de contaminación, éstas deberán lavarse y desinfectarse con soluciones que no modifiquen, reaccionen o alteren sus características y evitando la contaminación por arrastre.
5.1.4.2 En caso que el establecimiento ponga envases vacíos o tapas a disposición del consumidor, éstos deberán ser nuevos, estar limpios, desinfectados y empacados.
5.1.5 Especificaciones sanitarias del producto terminado.
5.1.5.1 Límites máximos permisibles del agua para consumo humano.
5.1.5.1.1 Organolépticas y físicas.
ESPECIFICACIÓN.
LÍMITE MÁXIMO PERMISIBLE.
Color.
15 (Pt/Co).
Turbiedad.
3,0 (UNT).
 
5.1.5.1.2 Microbiológicas.
ESPECIFICACIÓN.
LÍMITE MÁXIMO PERMISIBLE(1)
 
(NMP/100 mL)
UFC/100 mL
Organismos/100mL
Coliformes Totales.
<1,1
CERO
Ausencia
Pseudomonas aeruginosa(2).
<1,1
CERO
No aplica
Enterococos fecales(3).
<1,1
CERO
Ausencia
Esporas de Clostridium sulfito reductores(2, 3).
<1,1
CERO
No aplica
Mesofílicos Aerobios.
No aplica
(4)
No aplica
(1) La unidad a reportar será de acuerdo al método utilizado.
(2) Especificaciones sólo para agua mineral natural.
(3) La autoridad sanitaria establecerá los casos en que se realizará la determinación de estas especificaciones.
(4) Se determina en base al cálculo establecido en el punto 6.1.1, de esta Norma, en unidades de UFC/mL.
5.1.5.1.3 Metales, metaloides y compuestos inorgánicos.
ESPECIFICACIÓN
LÍMITE MÁXIMO PERMISIBLE
(mg/L)
Antimonio.
0,005
Arsénico.
0,01
Bario.
0,70
Borato como B.
5,00
Cadmio.
0,003
Cromo total.
0,05
Cobre.
1,00
Cianuro.
0,07
Fluoruros como F-.
0,70(5)
5,00(6)
Manganeso.
0,40
Mercurio.
0,001
Níquel.
0,02
Nitrógeno de nitratos.
10,00
Nitrógeno de nitritos.
0,06
Plomo.
0,01
Selenio.
0,01
(5)No aplica para aguas minerales naturales.
(6)Aplica para aguas minerales naturales, ver apartado de Etiquetado.
5.1.5.1.4 Compuestos orgánicos sintéticos.
ESPECIFICACIÓN.
LÍMITE MÁXIMO PERMISIBLE
(mg/L).
Compuestos orgánicos halogenados adsorbibles fijos.
0,0005
Compuestos orgánicos no halogenados.
0,01
Compuestos orgánicos halogenados adsorbibles purgables.
0,001
Carbono Orgánico Purgable.
0,01
Sustancias activas al azul de metileno.
0,5
 
5.1.5.1.5 Desinfectantes.
ESPECIFICACIÓN.
LÍMITE MÁXIMO PERMISIBLE
(mg/L).
Cloro residual libre.
0,1
 
 
5.1.5.1.6 Subproductos de desinfección.
DESINFECTANTE
UTILIZADO.
ESPECIFICACIÓN.
LÍMITE MÁXIMO PERMISIBLE
(mg/L).
Cloro
Formaldehído.
0,9
Bromodiclorometano.
0,06
Bromoformo.
0,1
Dibromoclorometano.
0,1
Cloroformo.
0,2
Ozono
Formaldehído.
0,9
Bromato.
0,01
 
5.1.5.1.6.1 En aguas minerales naturales, los subproductos de desinfección deberán estar ausentes.
5.1.5.1.7 Radiactivos.
ESPECIFICACIÓN.
LÍMITE MÁXIMO PERMISIBLE
(Bq/L).
Radiactividad beta total (7).
1,85
Radiactividad alfa total (7).
0,56
(7) Aplica sólo para aguas minerales naturales.
5.1.5.2 Aditivos y coadyuvantes de proceso.
Cuando se adicione al producto dióxido de carbono o anhídrido del ácido carbónico, nitrógeno o poliacrilamida se deberá sujetar a lo especificado en el ACUERDO.
5.1.5.3 Materia Extraña.
5.1.5.3.1 Ausente en cualquier presentación del producto terminado.
5.2 Hielo.
5.2.1 El proceso de fabricación de hielo debe cumplir con las especificaciones sanitarias del agua para consumo humano, además de las siguientes disposiciones:
5.2.1.1 Establecimientos.
5.2.1.1.1 Se debe contar con un dispositivo con solución para desinfección de calzado al ingreso de las áreas de llenado de moldes, desmoldado, corte, almacenamiento y envasado. Las personas que ingresen deberán desinfectar su calzado en estos dispositivos.
5.2.1.1.2 El andén de despacho debe ser desinfectado al inicio de las operaciones.
5.2.1.1.3 En los casos en que por operación sea necesario desplazar el hielo sobre el piso o cualquier otra superficie en las áreas de proceso o almacenamiento, éstas deberán limpiarse diariamente y desinfectarse con la frecuencia que sea necesaria, de tal forma que durante el manejo del hielo se evite el riesgo de contaminación del producto.
5.2.1.1.4 El llenado de los moldes debe hacerse a través de tubería fija.
5.2.1.1.5 Los moldes no deben sumergirse por completo en la salmuera.
5.2.1.1.6 Para el despegue del producto se deberá usar agua que se utiliza como materia prima.
5.2.2 Especificaciones sanitarias del producto.
5.2.2.1 El producto terminado deberá cumplir con las especificaciones establecidas para el agua de consumo humano de esta Norma y comercializarse preenvasado.
6. Control Sanitario del agua y hielo para consumo humano
6.1 Se debe contar con un programa de muestreo, el cual debe indicar como mínimo, el número de muestras que deben examinarse, el tamaño de esas muestras, el método de análisis empleado y su
sensibilidad, el número de muestras y cantidad de microorganismos que harán que el lote se considere inaceptable o fuera de especificaciones.
6.1.1 El parámetro de control de proceso, con excepción del proceso del agua mineral natural, será la cuenta total de mesofílicos aerobios. El límite máximo particular del establecimiento, se determinará de acuerdo a lo siguiente:
6.1.1.1 Se colectará un mínimo de 30 datos con una frecuencia semanal, que deberán estar dentro del intervalo de 0 a 1,000 UFC/mL.
6.1.1.2 Intervalo de tiempo para la colecta de datos deberá establecerse en un plazo no mayor a un año, a partir de la entrada en vigor de esta Norma o de inicio de operaciones del establecimiento.
6.1.1.3 El límite máximo permisible del establecimiento, será la media aritmética de los 30 datos más dos veces la desviación estándar.
6.1.2 Se podrá exentar la frecuencia semanal para aplicar una frecuencia mensual, sólo cuando sea sustentado mediante información asentada en bitácora, que no se excede el límite máximo en análisis realizados a lo largo de un año, posteriores a la determinación de la desviación estándar.
6.2 La frecuencia mínima de análisis de las especificaciones del producto terminado debe ser de acuerdo a los requisitos establecidos en el Cuadro 1 de esta Norma y deberá documentarse en bitácoras o registros.
Cuadro 1. Frecuencia mínima de análisis de agua y hielo.
ESPECIFICACIÓN.
FRECUENCIA.
Organolépticos y físicos.
Mensual.
Coliformes totales.
Semanal.
Metales, metaloides y compuestos inorgánicos.
Anual.
Compuestos orgánicos sintéticos.
Anual.
Desinfectantes.
Cada cuatro horas.
Subproductos desinfección.
Anual.
Radiactivos.
Cada cinco años.
 
6.3 Para metales, metaloides y compuestos inorgánicos, compuestos orgánicos sintéticos y radiactivos, se modificará la frecuencia de muestreo señalada en el Cuadro 1 de esta Norma a trimestral, cuando la fuente de abastecimiento contenga niveles más altos de los límites máximos permisibles señalados en esta Norma.
6.4 En la prueba de Pseudomonas aeruginosas la frecuencia debe ser mensual y cuando se demuestre mediante información asentada en bitácora que se encuentra ausente a lo largo de 12 meses, la frecuencia será trimestral.
7. Procedimiento de evaluación de la conformidad
7.1 La evaluación de la conformidad podrá ser solicitada por el representante legal o la persona que tenga facultades para ello, ante la autoridad competente o las personas acreditadas y aprobadas para tales efectos.
8. Etiquetado
8.1 La información sanitaria que debe figurar en la etiqueta de los productos preenvasados objeto de esta Norma, así como en los envases que pongan las empresas a disposición del consumidor, además de cumplir con lo establecido en la Norma Oficial Mexicana NOM-051-SCFI/SSA1-2010 (véase punto 2.3, del capítulo de Referencias, de esta Norma), deberá ajustarse a lo siguiente:
8.2 Se debe declarar:
8.2.1 En el caso de agua envasada, contenido de sodio en mg por 100 mL.
8.2.2 Cuando se utilice anhídrido carbónico, éste debe reportarse con el nombre común o los sinónimos establecidos en el ACUERDO, el agua adicionada con anhídrido carbónico podrá nombrarse como agua carbonatada o gasificada.
 
8.2.3 En el caso del hielo deberá ostentar la leyenda "Hielo para consumo humano".
8.2.4 Para el agua mineral natural, si el producto contiene más de 0.7 mg/L de fluoruro, en la etiqueta aparecerá, como parte del nombre del producto o muy cerca de éste, o en un algún otro lugar destacado, la siguiente frase: "Contiene fluoruro". Además, cuando el producto contenga más de 1.5 mg/L de fluoruro, se deberá incluir en la etiqueta la siguiente frase: "Este producto no es apto para lactantes y niños menores de siete años".
8.3 No se permite además de lo especificado en la Norma Oficial Mexicana NOM-051-SCFI/SSA1-2010 (véase punto 2.3, del capítulo de Referencias, de esta Norma), lo siguiente en el etiquetado y la publicidad del producto terminado:
8.3.1 Declaraciones que indiquen que el producto ha adquirido un valor especial o superior gracias a la adición de minerales o la modificación de sus propiedades tales como pH, estructura molecular, conductividad, cantidad de oxígeno, entre otros.
8.3.2. Ostentar leyendas de que el producto por sí solo sirve para adelgazar, variar las proporciones del cuerpo o bien para el control de peso.
8.3.3. Declarar u ostentar de forma escrita, gráfica o descriptiva, que los productos, su uso, ingredientes o cualquier otra característica, están recomendados, respaldados o aceptados por centros de investigación, asociaciones, entre otros.
9. Concordancia con normas internacionales
9.1 Esta Norma es parcialmente equivalente con la CODEX STAN 108-1981. Revisiones: 1997, 2008.
10. Bibliografía
10.1 Acuerdo por el que se determinan los aditivos y coadyuvantes en alimentos, bebidas y suplementos alimenticios, su uso y disposiciones sanitarias. Publicado el 16 de julio de 2012.
10.2 ISO 7704: 1985 Water quality-Evaluation of membrane filters used for microbiologial analyses.
10.3 Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American Public Health Association. 21th Ed. Washington D.C. 2005. EUA.
10.4 WHO Guidelines for Drinking-Water Quality. 3th Edition, Vol. 1. World Health Organization. Geneva, 2004.
11. Observancia de la Norma
11.1 La vigilancia del cumplimiento de esta Norma Oficial Mexicana corresponde a la Secretaría de Salud y a los Gobiernos de las Entidades Federativas en sus respectivos ámbitos de competencia.
12. Vigencia
12.1 Esta Norma entrará en vigor a los 60 días naturales después de su publicación en el Diario Oficial de la Federación.
TRANSITORIO
ÚNICO.- La entrada en vigor de esta norma, deja sin efectos a la Norma Oficial Mexicana NOM-201-SSA1-2002, Productos y servicios. Agua y hielo para consumo humano, envasados a granel. Especificaciones sanitarias, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 18 de octubre de 2002.
Sufragio Efectivo. No Reelección.
México, D.F., a 19 de diciembre de 2013.- El Comisionado Federal y Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, Mikel Andoni Arriola Peñalosa.- Rúbrica.
Apéndice A Normativo.
Métodos de pruebas microbiológicas.
A.1. Método de prueba para la determinación de Coliformes.
A.1.1. Fundamento.
 
Las bacterias coliformes son un grupo heterogéneo compuesto por varias especies. Existe poca evidencia que indique que estas bacterias coliformes pertenezcan a un solo género taxonómico. La falta de certeza en cuanto a su filiación taxonómica y la imprecisa correlación entre los métodos recomendados para la detección de coliformes han presentado problemas. El primero, es que Escherichia coli es aceptada como bacteria coliforme, la especie contiene variantes que no producen gas de la lactosa lo hacen después de 48 horas, por lo que no se les identifica por medio de este método. Segundo, la capacidad de fermentar la lactosa está frecuentemente asociada a genes localizados en plásmidos. Estos determinantes extracromosomales son fácilmente transferidos entre otras bacterias Gram negativas no relacionadas a las coliformes, que pueden, en consecuencia, ser recuperadas en la etapa inicial del análisis. No obstante en la práctica, la técnica ha demostrado su efectividad.
Coliformes, bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o anaerobios facultativos, que a 35 °C fermentan la lactosa con la producción de gas bajo las condiciones especificadas en esta Norma.
El método se basa en que las bacterias coliformes, fermentan la lactosa incubadas a 35 ±1 °C durante 24 a 48 h, resultando una producción de ácidos y gas el cual se manifiesta en las campanas de fermentación.
A.1.2 Condiciones de prueba, medidas de seguridad y de control de calidad.
A.1.2.1 Trabajar en condiciones asépticas en un área limpia y descontaminada.
A.1.2.2 Todo el material que tenga contacto con las muestras bajo estudio debe esterilizarse mediante horno, durante 2 h de 170 a 175 °C o 1 h a 180 °C o autoclave a 121 ±1.0 °C durante 15 min como mínimo.
A.1.2.3 Seguir las indicaciones precautorias que se señalan en el apartado de preparación de medios de cultivo.
A.1.2.4 El laboratorio debe tener claramente definido un sistema de control de calidad para asegurar que los materiales, equipos, reactivos, medios de cultivo y técnicas sean adecuados para la prueba.
A.1.2.5 Cuando se indique agua debe entenderse como agua destilada con pH de 5 a 7.
A.1.2.6 El material de vidrio puede sustituirse por material desechable no tóxico. No debe usarse material de vidrio dañado por la esterilización repetida y éste debe ser químicamente inerte.
A.1.3. Materiales.
A.1.3.1 Pipetas bacteriológicas para distribuir 10 mL y 1 mL (o sí es necesario de 11 mL y 2 mL), con tapón de algodón. Las pipetas pueden ser graduadas en volúmenes iguales a una décima de su volumen total.
A.1.3.2 Frascos de vidrio de 250 mL con tapón de rosca.
A.1.3.3 Utensilios esterilizables para la obtención de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas, etc.
A.1.3.4 Tubos de cultivo 20 x 200 mm y de 16 x 160 mm con tapones metálicos o de rosca.
A.1.3.5 Campanas de fermentación (tubos de Durham).
A.1.3.6 Gradillas de plástico o metal.
A.1.3.7 Asa de platino o nicromel de aproximadamente 3 mm de diámetro.
A.1.4 Medios de cultivo y reactivos. Los reactivos que a continuación se mencionan deben ser grado analítico.
A.1.4.1 Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada).
Ingrediente.
Cantidad.
Fosfato monopotásico.
34.0 g
Agua.
1.0 L
 
 
A.1.4.1.1 Preparación.
A.1.4.1.1.1 Disolver el fosfato en 500 mL de agua y ajustar el pH a 7.2 con solución reguladora de hidróxido de sodio 0.01 N o una disolución de HCl 0.01 N según se requiera.
A.1.4.1.1.2 Llevar a un litro con agua.
A.1.4.1.1.3 Esterilizar durante 15 min a 121 ±1.0 °C.
A.1.4.1.1.4 Conservar en refrigeración (solución concentrada).
A.1.4.1.1.5 Tomar 1.25 mL de la solución concentrada y llevar a un litro con agua.
A.1.4.1.1.6 Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 mL para tener disponible cuando se requiera realizar dilución de la muestra.
A.1.4.1.1.7 Esterilizar durante 15 min a 121 ±1 °C.
A.1.4.1.1.8 Después de la esterilización, el pH y los volúmenes finales de la solución de trabajo deben ser iguales a los iniciales.
A.1.4.1.1.9 Si este diluyente no es usado inmediatamente, almacenar en lugar obscuro a una temperatura entre 0 a 5 °C en un tiempo no mayor de un mes, en condiciones tales que no alteren su volumen o composición.
A.1.4.2 Caldo lactosado (medio de enriquecimiento para agua potable y hielo).
Ingrediente.
Medio de concentración
1.5
Medio de concentración
sencilla.
Extracto de carne.
4.5 g
3.0 g
Peptona de gelatina.
7.5 g
5.0 g
Lactosa.
7.5 g
5.0 g
Agua destilada.
1000.0 mL
1000.0 mL
 
A.1.4.2.1 Preparación.
A.1.4.2.1.1 Disolver los ingredientes en 1 L de agua, calentando si es necesario o el medio completo deshidratado, siguiendo las instrucciones del fabricante.
A.1.4.2.1.2 Ajustar el pH final con disolución de hidróxido de sodio 0.01 N o una disolución de HCl 0.01 N según se requiera, de tal manera que después de la esterilización éste sea de 6.9 ±0.2 a 25 °C.
A.1.4.2.1.3 Distribuir en volúmenes de 10 mL en tubos con dimensiones de 16 x 160 mm el medio de concentración sencilla y de 20 mL en tubos de 20 x 200 mm el medio de concentración 1.5, cada tubo debe tener campana de fermentación.
A.1.4.2.1.4 Esterilizar en autoclave por 15 min a 121 ±1.0 °C.
A.1.4.2.1.5 Enfriar rápidamente para evitar una exposición excesiva al calor. El aspecto del caldo es claro y de color beige.
A.1.4.2.1.6 Se puede utilizar una concentración doble del medio de cultivo, en cuyo caso se emplearán 10 mL del caldo preparado, cuando se agreguen 10 mL de la muestra.
A.1.4.3 Caldo lauril sulfato triptosa (medio de enriquecimiento selectivo).
Ingrediente.
Medio de
concentración
1.5
Medio de concentración
Sencilla.
Triptosa.
30.0 g
20.0 g
Lactosa.
7.5 g
5.0 g
Fosfato dipotásico.
4.125 g
2.75 g
Fosfato monopotásico.
4.125 g
2.75 g
Cloruro de sodio.
7.50 g
5.0 g
Lauril sulfato de sodio.
0.15 g
0.1 g
Agua destilada.
1.0 L
1.0 L
 
A.1.4.3.1 Preparación.
A.1.4.3.1.1 Disolver los componentes en 1 L de agua, calentando si es necesario o cuando utilice medio de cultivo deshidratado siga las instrucciones del fabricante.
A.1.4.3.1.2 Ajustar el pH con disolución de hidróxido de sodio 0.01 N o una disolución de HCl 0.01 N según se requiera, de tal manera que después de la esterilización éste sea de 6.8 ±0.2 a 25 °C.
A.1.4.3.1.3 Distribuir en volúmenes de 10 mL en tubos con dimensiones de 16 x 160 mm el medio de concentración sencilla y de 20 mL en tubos de 20 x 200 mm, el medio de concentración 1.5, cada tubo debe tener campana de fermentación (Durham).
A.1.4.3.1.4 Esterilizar en autoclave por 15 min a 121 ±1.0 °C.
A.1.4.3.1.5 Se recomienda almacenar en refrigeración el medio una vez preparado.
A.1.4.3.1.6 Las campanas de fermentación no deben de contener burbujas de aire una vez atemperadas después de la esterilización.
A.1.4.3.1.7 Alternativamente a las campanas de Durham utilizar púrpura de bromocresol a una concentración de 0.01 g/L al caldo de lauriltriptosa, la producción de ácido se observará por el vire de este indicador.
A.1.4.3.1.8 Se puede utilizar una concentración doble del medio de cultivo, en cuyo caso se emplearán 10 mL de caldo preparado, cuando se agreguen 10 mL de muestra.
A.1.4.4 Caldo bilis verde brillante (medio de confirmación).
Ingrediente.
Cantidad
Peptona.
10.0 g
Lactosa.
10.0 g
Sales biliares.
20.0 g
Verde brillante.
0.0133 g
Agua.
1.0 L
 
A.1.4.4.1 Preparación.
A.1.4.4.1.1 Disolver los componentes o el medio completo deshidratado en agua, calentar si es necesario.
A.1.4.4.1.2 Ajustar el pH con disolución de hidróxido de sodio 0.01 N o una disolución de HCl 0.01 N según se requiera, de tal manera que después de la esterilización éste sea de 7.2 a 25 °C.
A.1.4.4.1.3 Distribuir el medio en cantidades de 10 mL en tubos de 16 x 160 mm conteniendo campana de fermentación.
A.1.4.4.1.4 Esterilizar en autoclave por 15 min a 121 ±1.0 °C.
A.1.4.4.1.5 Las campanas de fermentación no deben contener burbujas de aire después de la esterilización.
A.1.4.5 Caldo EC.
Ingrediente.
Medio de concentración
Sencilla.
Triptosa.
20.0 g
Lactosa.
5.0 g
Fosfato dipotásico.
4.0 g
Fosfato monopotásico.
1.5 g
Cloruro de sodio.
5.0 g
Mezcla de sal de bilis.
1.5 g
Agua destilada.
1.0 L
 
A.1.4.5.1 Preparación.
A.1.4.5.1.1 Disolver los componentes en 1 L de agua, calentando si es necesario o cuando utilice medio de cultivo deshidratado siga las instrucciones del fabricante.
A.1.4.5.1.2 Distribuir en volúmenes de 10 mL en tubos con dimensiones de 16 x 160 mm cada tubo debe tener campana de fermentación (Durham) invertida.
A.1.4.5.1.3 Ajustar el pH con disolución de hidróxido de sodio 0.01 N o una disolución de HCl 0.01 N según se requiera, de tal manera que después de la esterilización éste sea de 6.9 ±0.2 a 25 °C.
A.1.4.5.1.4 Esterilizar en autoclave por 12 min a 121 ±1.0 °C.
A.1.4.5.1.5 Se recomienda almacenar en refrigeración el medio una vez preparado.
A.1.5 Aparatos e instrumentos.
A.1.5.1 Horno para esterilizar que alcance una temperatura mínima de 170 °C, con termómetro calibrado y/o verificado.
A.1.5.2 Incubadora que evite variaciones mayores a 0.5 °C y termómetro calibrado y/o verificado.
A.1.5.3 Incubadora con recirculación de agua que evite variaciones mayores a 0.5 °C y termómetro calibrado y/o verificado.
A.1.5.4 Termómetro de máximas y mínimas.
A.1.5.5 Autoclave que alcance una temperatura mínima de 121 ±1.0 °C con termómetro calibrado y/o verificado.
A.1.5.6 Potenciómetro con una escala mínima de 0.1 unidades de pH a 25 °C.
A.1.6 Recomendaciones generales previas al análisis de la muestra.
A.1.6.1 Las muestras en frascos con un espacio vacío (de al menos 2.5 cm), pueden homogeneizarse por inversión rápida 25 veces. Las muestras en frascos que tengan de 2/3 a 3/4 de lleno, deberán agitarse 25 movimientos de arriba abajo en un arco de 30 cm completados en un tiempo de 7 seg, para asegurar una unidad analítica representativa.
A.1.6.2 Como alternativa al uso de campanas de fermentación (Durham) utilizar púrpura de bromocresol a una concentración de 0.01 g/L al medio de cultivo, la producción ácida se observará por el vire de este indicador.
A.1.6.3 Los tubos positivos se manifiestan por el vire del indicador a color amarillo. Se puede utilizar una concentración doble del medio de cultivo, en cuyo caso se emplearán 10 mL de caldo preparado, cuando se agreguen 10 mL de muestra.
A.1.6.4 Procedimiento.
A.1.6.4.1 Coliformes totales presuntivo.
A.1.6.4.1.1 Inoculación. Agitar la muestra. Transferir volúmenes de 10 mL de muestra a cada uno de 5
tubos con 20 mL de caldo lactosado de mayor concentración o caldo lauril sulfato triptosa de concentración 1.5 y 1.0 mL y 0.1 mL de muestra a cada uno de los tubos de las series de 5 respectivamente con 10 mL de caldo lactosado de concentración sencilla o caldo lauril sulfato triptosa con purpura de bromocresol.
A.1.6.4.1.2 Incubación. Incubar los tubos a 35 °C. Examinar a las 24 ±2 h y observar si hay formación de gas o la formación de gas no se observa en este tiempo, incubar por 48 ±2 h.
A.1.6.4.2 Coliformes totales confirmativo.
A.1.6.4.2.1 De cada tubo de la prueba con caldo lactosado o caldo lauril sulfato triptosa con púrpura de bromocresol que muestre hidrólisis del medio y formación de gas, agitar y tomar una azada, procediendo a sembrar en un No. igual de tubos con medio de confirmación, caldo bilis verde brillante incubar a 35 ±0.5 °C por 24 ±2 h o si la formación de gas no se observa en este tiempo, incubar por 48 ±2 h
A.1.6.4.3 Coliformes fecales confirmativo.
A.1.6.4.3.1 Como una alternativa de cada tubo que muestre hidrólisis del medio o formación de gas, agitar y tomar una azada, procediendo a sembrar en un No. igual de tubos con medio EC. Incubar en incubadora con recirculación de agua a 44.5 ±0.2 °C por 24 ±2 h, observando que el tiempo entre la inoculación y la colocación de los tubos en el baño no exceda de 30 min y que el agua de incubación cubra por entero al medio de cultivo en los tubos.
A.1.7 Expresión de los resultados.
A.1.7.1 Del procedimiento coliformes totales confirmativo considerar los tubos con medio bilis verde brillante en los que se observe formación de gas después del periodo de incubación requerido y leer el NMP de coliformes totales/100 mL (véase tabla A.1.1).
A.1.7.2 Del procedimiento coliformes fecales confirmativo considerar los tubos con medio EC en los que se observe formación de gas después del periodo de incubación requerido y leer el NMP de coliformes fecales/100 mL (véase tabla A.1.1.).
A.1.8 Consideraciones generales.
A.1.8.1 Cuando sólo una dilución muestra tres tubos positivos, elegir ésta y las diluciones mayores posteriores.
A.1.8.2 Cuando más de una dilución muestra tres tubos positivos y la última da menos de tres, elegir ésta última y las dos diluciones anteriores más bajas.
A.1.8.3 Cuando en ninguna dilución hay tres tubos positivos y éstos se encuentran en más de tres diluciones, seleccionar las dos diluciones mayores positivas y la siguiente.
A.1.8.4 Cuando los tubos positivos sólo se encuentran en la muestra sin diluir (10 mL) y en la primera dilución (1 mL), seleccionar las tres primeras diluciones para el cálculo del NMP.
A.1.8.5 En cada caso se obtiene un número de tres cifras, lo cual es representado (véase tabla A.1.1). En la columna que indica el número de tubos positivos se busca el índice del NMP.
A.1.8.6 La técnica de NMP puede admitir gran cantidad de variaciones. Los resultados obtenidos con esta técnica deben ser utilizados con precaución.
A.1.8.7 Evitar imprecisiones en los conteos debidos a descuido o fallas para reconocer colonias.
A.1.9 Índices de reproducibilidad y repetibilidad.
A.1.9.1 La precisión del analista deberá estar dentro de un 5% y entre analistas del 10%.
A.1.10 Informe de prueba.
A.1.10.1. Informar como:
A.1.10.1.1 NMP Coliformes totales/100 mL.
A.1.10.1.2 NMP Coliformes fecales/100 mL.
Tabla. A.1.1- Número más probable (NMP) para 100 mL de muestra cuando se utilizan 5 porciones en
cada una de 3 diluciones con series geométricas.
No. de Tubos
Positivos
No. de Tubos
Positivos
No. de Tubos
Positivos
No. de Tubos
Positivos
No. de Tubos
Positivos
No. de Tubos
Positivos
10
m
L
1.0 m
L
0.1 m
L
N
M
P
10 m
L
1.0 m
L
0.1 m
L
N
M
P
10 m
L
1.0
m
L
0.1 m
L
N
M
P
10
m
L
1.0 m
L
0.1 m
L
N
M
P
10 m
L
1.0 m
L
0.1 m
L
N
M
P
10
m
L
1.0 m
L
0.1 m
L
N
M
P
0
0
0
<1.
8
1
0
0
2
2
0
0
4.
5
3
0
0
7.
8
4
0
0
1
3
5
0
0
23
0
0
1
1.8
1
0
1
4
2
0
1
6.
8
3
0
1
11
4
0
1
1
7
5
0
1
31
0
0
2
3.6
1
0
2
6
2
0
2
9.
1
3
0
2
13
4
0
2
2
1
5
0
2
43
0
0
3
5.4
1
0
3
8
2
0
3
12
3
0
3
16
4
0
3
2
5
5
0
3
58
0
0
4
7.2
1
0
4
10
2
0
4
14
3
0
4
20
4
0
4
3
0
5
0
4
76
0
0
5
9.0
1
0
5
12
2
0
5
16
3
0
5
23
4
0
5
3
6
5
0
5
95
0
1
0
1.8
1
1
0
4
2
1
0
6.
8
3
1
0
11
4
1
0
1
7
5
1
0
33
0
1
1
3.6
1
1
1
6.
1
2
1
1
9.
2
3
1
1
14
4
1
1
2
1
5
1
1
46
0
1
2
5.5
1
1
2
8.
1
2
1
2
12
3
1
2
17
4
1
2
2
6
5
1
2
64
0
1
3
7.3
1
1
3
10
2
1
3
14
3
1
3
20
4
1
3
3
1
5
1
3
84
0
1
4
9.1
1
1
4
12
2
1
4
17
3
1
4
23
4
1
4
3
5
5
1
4
110
0
1
5
11
1
1
5
14
2
1
5
19
3
1
5
27
4
1
5
4
2
5
1
5
130
0
2
0
3.7
1
2
0
6.
1
2
2
0
9.
3
3
2
0
14
4
2
0
2
2
5
2
0
49
0
2
1
5.5
1
2
1
8.
2
2
2
1
12
3
2
1
17
4
2
1
2
6
5
2
1
70
0
2
2
7.4
1
2
2
10
2
2
2
14
3
2
2
20
4
2
2
3
2
5
2
2
95
0
2
3
9.2
1
2
3
12
2
2
3
17
3
2
3
24
4
2
3
3
8
5
2
3
120
0
2
4
11
1
2
4
15
2
2
4
19
3
2
4
27
4
2
4
4
4
5
2
4
150
0
2
5
13
1
2
5
17
2
2
5
22
3
2
5
31
4
2
5
5
0
5
2
5
180
0
3
0
5.6
1
3
0
8.
3
2
3
0
12
3
3
0
17
4
3
0
2
7
5
3
0
79
0
3
1
7.4
1
3
1
10
2
3
1
14
3
3
1
21
4
3
1
3
3
5
3
1
110
 
0
3
2
9.3
1
3
2
13
2
3
2
17
3
3
2
24
4
3
2
3
9
5
3
2
140
0
3
3
11
1
3
3
15
2
3
3
20
3
3
3
28
4
3
3
4
5
5
3
3
180
0
3
4
13
1
3
4
17
2
3
4
22
3
3
4
31
4
3
4
5
2
5
3
4
210
0
3
5
15
1
3
5
19
2
3
5
25
3
3
5
35
4
3
5
5
9
5
3
5
250
0
4
0
7.5
1
4
0
11
2
4
0
15
3
4
0
21
4
4
0
3
4
5
4
0
130
0
4
1
9.4
1
4
1
13
2
4
1
17
3
4
1
24
4
4
1
4
0
5
4
1
170
0
4
2
11
1
4
2
15
2
4
2
20
3
4
2
28
4
4
2
4
7
5
4
2
220
0
4
3
13
1
4
3
17
2
4
3
23
3
4
3
32
4
4
3
5
4
5
4
3
280
0
4
4
15
1
4
4
19
2
4
4
25
3
4
4
36
4
4
4
6
2
5
4
4
350
0
4
5
17
1
4
5
22
2
4
5
28
3
4
5
40
4
4
5
6
9
5
4
5
430
0
5
0
9.4
1
5
0
13
2
5
0
17
3
5
0
25
4
5
0
4
1
5
5
0
240
0
5
1
11
1
5
1
15
2
5
1
20
3
5
1
29
4
5
1
4
8
5
5
1
350
0
5
2
13
1
5
2
17
2
5
2
23
3
5
2
32
4
5
2
5
6
5
5
2
540
0
5
3
15
1
5
3
19
2
5
3
26
3
5
3
37
4
5
3
6
4
5
5
3
920
0
5
4
17
1
5
4
22
2
5
4
29
3
5
4
41
4
5
4
7
2
5
5
4
1600
0
5
5
19
1
5
5
24
2
5
5
32
3
5
5
45
4
5
5
8
1
5
5
5
>160
0
Fuente: AOAC 18a.. Edición. Revisión 2, 2007.
A.2 Método de prueba para la determinación Pseudomonas aeruginosa.
A.2.1 Método de prueba para el NMP.
A.2.1.1 Fundamento.
Es un método de estimación probabilística de la densidad bacteriana presente en una muestra, basada en la dilución de la misma, sembrada e incubada en réplicas de tubos con caldo asparagina, que en presencia de luz UV produce un pigmento verde fluorescente (prueba presuntiva). La prueba confirmativa consiste en sembrar cada uno de los tubos que producen fluorescencia en medio de acetamida. La Pseudomonas aeruginosa tiene la capacidad de desaminar la acetamida en amoniaco alcalinizando el medio y desarrollando un color rojo que se detecta con ayuda del indicador rojo de fenol.
Las Pseudomonas aeruginosa, es un bacilo Gram negativo, aerobio, con flagelos polares que pertenece a la Familia Pseudomonadaceae. En medios adecuados produce un pigmento azulado llamado piocianina. Muchas cepas también producen pigmentos pero de color verde fluorescente (fluoresceína). Son catalasa y oxidasa positivas y producen amoniaco a partir de la arginina. Crecen en citrato como única fuente de carbono.
La Pseudomonas aeruginosa es un organismo común en el medio ambiente y se puede encontrar en heces, tierra, agua y aguas residuales. Se multiplica en el agua y se considera como una de las principales causas de enfermedades nosocomiales.
Pseudomonas aeruginosa es una bacteria que rara vez causa enfermedad seria en individuos sanos y se
le considera como patógeno oportunista. Predominantemente causa daños en quemaduras, heridas, tracto respiratorio de personas enfermas e infecciones en ojos. En pacientes inmunocomprometidos puede causar fibrosis quística e infecciones pulmonares. También produce foliculitis asociadas a aguas de albercas y SPA contaminados. Muchas cepas son resistentes a varios agentes antimicrobianos.
No hay evidencias de que el agua contaminada con Pseudomonas aeruginosa haya sido fuente de infección para la población en general, pero en personas con alta susceptibilidad como niños, ancianos y personas inmunocomprometidas constituye un riesgo para la salud, por lo que se convierte en un microorganismo de importancia sanitaria. La presencia de altos índices de Pseudomonas aeruginosa está asociada a quejas acerca del sabor, olor y turbiedad y no así a brotes.
A.2.1.2 Condiciones de prueba, medidas de seguridad y de control de calidad.
A.2.1.2.1 Trabajar en condiciones asépticas en un área limpia y descontaminada.
A.2.1.2.2 Todo el material que tenga contacto con las muestras bajo estudio deberá esterilizarse mediante horno, durante 2 h de 170 °C a 175 °C o 1 h a 180 °C o en autoclave, a 121 ±1.0 °C durante 15 min como mínimo.
A.2.1.2.3 Seguir las indicaciones precautorias que se señalan en el apartado de preparación de medios de cultivo.
A.2.1.2.4 El laboratorio debe tener claramente definido un sistema de control de calidad, para asegurar que los materiales, equipos, reactivos, medios de cultivo y técnicas sean adecuados para la prueba.
A.2.1.2.5 Cuando se indique agua, debe entenderse agua destilada, con un pH de 5 a 7.
A.2.1.2.6 El material de vidrio puede sustituirse por material desechable no tóxico. No debe usarse material de vidrio dañado por esterilización repetida y éste debe ser químicamente inerte.
A.2.1.3. Materiales.
A.2.1.3.1 Pipetas bacteriológicas para distribuir 10 mL y 1 mL, con tapón de algodón y divisiones de 0.1 mL.
A.2.1.3.1.1 Las pipetas pueden ser graduadas en volúmenes iguales a una décima de su volumen total o un dispensador de líquidos equivalente.
A.2.1.3.2 Frascos de vidrio de 500 mL y un litro con tapón de rosca.
A.2.1.3.3 Tubos de 16 x 150 mm y 18 x 200 mm con tapón de rosca.
A.2.1.3.4 Botellas de dilución de borosilicato de boca ancha con tapón de rosca.
A.2.1.3.5 Mechero de Bunsen.
A.2.1.3.6 Gradillas de plástico o metal.
A.2.1.3.7 Asas bacteriológicas de 3 mm a 3.5 mm de diámetro con portaasa.
A.2.1.3.8 Lentes protectores.
A.2.1.3.9 Termómetro de inmersión parcial con división mínima de 1 °C para incubadora calibrado o verificado.
A.2.1.3.10 Termómetro de máximas para autoclave con división mínima de 0.5 °C calibrado o ciclos de esterilización validados.
A.2.1.3.11 Cinta testigo para procesos de esterilización por calor húmedo.
A.2.1.3.12 Probetas de 100, 500 y 1000 mL.
A.2.1.4 Medios de cultivo, reactivos y soluciones.
A.2.1.4.1 Los reactivos que a continuación se mencionan deben ser grado analítico.
A.2.1.4.1.1 Caldo asparagina.
Ingrediente.
Cantidad.
Concentración
sencilla (1X).
Concentración
doble (2X).
Concentración
triple (3X).
Concentración
séxtuple (6X).
1mL o 0.1 mL de
muestra con 10
mL de caldo.
10 mL muestra
con 10 mL de
caldo.
100 mL de
muestra con 50
mL de caldo.
100 mL de
muestra con 20
mL de caldo.
Asparagina, DL
3.0 g
6.0 g
9.0 g
18.0 g
K2HPO4, fosfato
dipotásico anhidro
monohidrogenado.
1.0 g
2.0 g
3.0 g
6.0 g
MgSO4â¢7H2O,
Sulfato de
magnesio.
0.5 g
1.0 g
1.5 g
3.0 g
Agua.
1 L
1 L
1 L
1 L
 
A.2.1.4.1.1.1 Preparación.
A.2.1.4.1.1.1.1 Disolver todos los ingredientes en un litro de agua y ajustar a pH de 6.9 a 7.2 con disolución de hidróxido de sodio 0.01 N o una disolución de HCl 0.01N según se requiera. Distribuir en volúmenes adecuados de acuerdo a la concentración sencilla, doble o según se requiera. Esterilizar durante 15 min a 121 °C ±1.0 °C. Después de la esterilización, el pH debe estar dentro del intervalo descrito y los volúmenes finales deben ser iguales a lo indicado en la tabla (véase tabla A.1.1).
NOTA: En caso de no contar con fórmula comercial deshidratada, preparar por ingredientes.
A.2.1.4.1.2 Caldo acetamida.
Ingrediente.
Cantidad.
Acetamida.
10.0 g
NaCl, cloruro de sodio.
5.0 g
K2HPO4, fosfato dipotásico anhidromonohidrogenado.
1.39 g
KH2PO4, fosfato monopotásico anhidro dihidrogenado.
0.73 g
MgSO4â¢7 H2O, Sulfato de magnesio
0.5 g
Agua.
1 L
 
A.2.1.4.1.2.1 Preparación:
A.2.1.4.1.2.1.1 Disolver todos los ingredientes en un litro de agua y ajustar el pH con solución reguladora de hidróxido de sodio 0.01 N y una disolución reguladora de HCl 0.01N a 7.2 ±0.1.
A.2.1.4.1.2.1.2 Pesar 1.2 g de rojo de fenol y disolver en 100 mL de solución de NaOH 0.01N y adicionar 1 mL por litro de caldo acetamida. La solución de rojo de fenol concentrada se puede utilizar hasta 1 año después de su preparación.
A.2.1.4.1.2.1.3 Distribuir en volúmenes de 10 mL. Esterilizar durante 15 min a 121 °C ±1.0 °C. Después de la esterilización, el pH debe ser de 7.0 ±0.2.
A.2.1.4.1.2.1.4 Sí se prefiere utilizar agar inclinado, adicionar 15 g de agar por litro de medio. Calentar para disolver el agar y distribuir 8 mL en tubos de 16 x 150 mm. Esterilizar y enfriar inclinando los tubos para obtener un bisel largo.
NOTA: En caso de no contar con fórmula comercial deshidratada, preparar por ingredientes.
A.2.1.4.1.3 Etanol al 70%.
Ingrediente.
Cantidad.
Etanol al 95%.
700 mL
Agua destilada.
Adicionar hasta un volumen final de
1000 mL
 
 
A.2.1.4.1.4 Soluciones diluyentes.
A.2.1.4.1.4.1 Solución concentrada reguladora de fosfatos.
Ingrediente.
Cantidad.
Fosfato de sodio monobásico.
34.0 g
Agua.
1.0 L
 
A.2.1.4.1.4.1.1 Preparación:
A.2.1.4.1.4.1.1.1 Disolver el fosfato en 500 mL de agua y ajustar el pH a 7.2 ±0.2 con disolución de hidróxido de sodio 0.01 N o una disolución de HCl 0.01 N según se requiera. Llevar a un litro con agua. Esterilizar durante 15 min a 121 °C ±1.0 °C. Conservar en refrigeración.
A.2.1.4.1.4.1.2 Solución de trabajo.
A.2.1.4.1.4.1.2.1 Medir 1.25 mL de la solución concentrada y llevar a un litro con agua. Distribuir en porciones de 450 mL, 225 mL, 99 mL, 90 mL y 9 mL según se requiera. Esterilizar a 121 °C ±1.0 °C durante 15 min. Después de la esterilización los volúmenes finales de la solución de trabajo deberán ser de acuerdo a lo requerido y el pH debe estar dentro del intervalo descrito.
A.2.1.4.1.5 Agua peptonada.
Ingrediente.
Cantidad.
Peptona.
1.0 g
Cloruro de sodio.
8.5 g
Agua.
1.0 L
 
A.2.1.4.1.5.1 Preparación.
A.2.1.4.1.5.1.1 Disolver los componentes en un litro de agua. Ajustar el pH a 7.0 ±0.1 con disolución de hidróxido de sodio 0.01 N o una disolución de HCl 0.01 N según se requiera. Si este diluyente no es usado inmediatamente, almacenar en lugar oscuro a una temperatura entre 2 °C a 5 °C por un tiempo no mayor de 1 mes, en condiciones tales que no alteren su volumen o composición.
A.2.1.5 Aparatos e instrumentos.
A.2.1.5.1 Incubadora con termostato que evite variaciones mayores de ±1.0 °C, provista con termómetro calibrado y/o verificado.
A.2.1.5.2 Horno para esterilizar que alcance una temperatura mínima de 170 °C, con termómetro calibrado y/o verificado.
A.2.1.5.3 Termómetro de máximas calibrado o ciclo de esterilización validado.
A.2.1.5.4 Lámpara de luz UV de longitud de onda de 360 ±20 nm.
A.2.1.5.5 Potenciómetro con sensibilidad de 0.1 de unidad de pH.
A.2.1.5.6 Autoclave que alcance una temperatura de 121 °C con termómetro calibrado y previamente evaluada con esporas de Geobacillus stearothermophilus.
A.2.1.5.7 Balanza granataria con sensibilidad de 0.1 g.
A.2.1.6 Preparación y conservación de las muestras.
A.2.1.6.1 Descontaminar el exterior de los contenedores de la muestra con etanol o isopropanol al 70%.
A.2.1.6.2 Realizar diluciones decimales cuando proceda.
A.2.1.7 Recomendaciones generales previas para al análisis de la muestra.
A.2.1.7.1 Las muestras en frascos con un espacio vacío (de al menos 2.5 cm), pueden homogeneizarse
por inversión rápida 25 veces. Las muestras en frascos que tengan de 2/3 a ¾ de lleno, deberán agitarse 25 movimientos de arriba abajo en un arco de 30 cm completados en un tiempo de 7 seg, para asegurar una unidad analítica representativa.
A.2.1.7.2 Como alternativa al uso de campanas de fermentación (Durham) utilizar púrpura de bromocresol a una concentración de 0.01 g/L al medio de cultivo, la producción ácida se observará por el vire de este indicador.
Los tubos positivos se manifiestan por el vire del indicador a color amarillo. Se puede utilizar una concentración doble del medio de cultivo, en cuyo caso se emplearán 10 mL de caldo preparado, cuando se agreguen 10 mL de muestra.
A.2.1.7.2.1 Procedimiento.
A.2.1.7.2.1.1 Prueba presuntiva.
A.2.1.7.2.1.1.1 Utilizar 5 tubos con caldo asparagina por cada porción de 10 mL, 1 mL y 0.1 mL de muestra. Para inóculos de 10 mL de agua, preparar el medio a doble concentración y para volúmenes de 1 y 0.1 mL a concentración sencilla. Hacer diluciones decimales de la muestra cuando se considere necesario con solución reguladora de fosfatos o agua peptonada.
A.2.1.7.2.1.1.2 Incubar los tubos de 35 °C ±1 °C por 24 y 48 h. Examinar los tubos con una lámpara de luz UV en cuarto oscuro. La producción de un pigmento verde fluorescente se considera como una prueba presuntiva positiva.
A.2.1.7.2.1.2 Prueba confirmativa.
A.2.1.7.2.1.2.1 Inocular 0.1 mL de cada uno de los tubos positivos en caldo acetamida o en la superficie de agar acetamida inclinado.
A.2.1.7.2.1.2.2 Incubar los tubos de 35 °C ±1 °C. El desarrollo de un color rojo (pH alcalino) dentro de las 24 a 36 h se considera como una prueba confirmativa para Pseudomonas aeruginosa.
A.2.1.8 Expresión de los resultados.
A.2.1.8.1 Cálculos.
A.2.1.8.1.1 Calcular la densidad de Pseudomonas aeruginosa por el número más probable en 100 mL con el número de tubos confirmados (véase tabla A.2.1).
A.2.1.8.1.2 Considerar en el cálculo del resultado final la(s) dilución(es) realizada(s) cuando proceda.
A.2.1.8.2 Interpretación de resultados.
A.2.1.8.2.2 El desarrollo de un color rojo en los tubos con caldo acetamida o placas con agar acetamida dentro de las 24 h a 36 h incubados de 35 °C ±1 °C se considera como una prueba confirmativa para Pseudomonas aeruginosa.
A.2.1.8.3 Criterios de validez de la prueba.
A.2.1.8.3.1 Esta prueba tiene validez cuando todos los tubos de la menor dilución sean positivos y todos los tubos de la dilución mayor sean negativos o la combinación de ambos cuando la muestra contenga Pseudomonas aeruginosa y cuando se inocule un cultivo control con 100 UFC.
A.2.1.8.4 Índices de reproducibilidad y repetibilidad.
A.2.1.8.4.1 Basado en una distribución normal, el 95% de las medias de cada grupo de resultados analíticos deben estar entre +2 y -2 desviaciones estándar con respecto a la media de las medias.
A.2.1.8.4.2 La precisión del analista deberá estar dentro de un 5%.
A.2.1.9 Informe de prueba.
A.2.1.9.1 Informar como:
A.2.1.9.1.1 Pseudomonas aeruginosa: (véase tabla A.2.1) NMP/100 mL.
Tabla A.2.1- Número más probable (NMP) para 100 mL de muestra cuando se utilizan 5 porciones en cada una de 3 diluciones con series geométricas.
No. de Tubos
Positivos
No. de Tubos
Positivos
No. de Tubos
Positivos
No. de Tubos
Positivos
No. de Tubos
Positivos
No. de Tubos
Positivos
10
m
L
1.0 m
L
0.1 m
L
N
M
P
10 m
L
1.0 m
L
0.1 m
L
N
M
P
10 m
L
1.0
m
L
0.1 m
L
N
M
P
10
m
L
1.0 m
L
0.1 m
L
N
M
P
10 m
L
1.0 m
L
0.1 m
L
N
M
P
10
m
L
1.0 m
L
0.1 m
L
N
M
P
0
0
0
<1.
8
1
0
0
2
2
0
0
4.
5
3
0
0
7.
8
4
0
0
1
3
5
0
0
23
0
0
1
1.8
1
0
1
4
2
0
1
6.
8
3
0
1
11
4
0
1
1
7
5
0
1
31
0
0
2
3.6
1
0
2
6
2
0
2
9.
1
3
0
2
13
4
0
2
2
1
5
0
2
43
0
0
3
5.4
1
0
3
8
2
0
3
12
3
0
3
16
4
0
3
2
5
5
0
3
58
0
0
4
7.2
1
0
4
10
2
0
4
14
3
0
4
20
4
0
4
3
0
5
0
4
76
0
0
5
9.0
1
0
5
12
2
0
5
16
3
0
5
23
4
0
5
3
6
5
0
5
95
0
1
0
1.8
1
1
0
4
2
1
0
6.
8
3
1
0
11
4
1
0
1
7
5
1
0
33
0
1
1
3.6
1
1
1
6.
1
2
1
1
9.
2
3
1
1
14
4
1
1
2
1
5
1
1
46
0
1
2
5.5
1
1
2
8.
1
2
1
2
12
3
1
2
17
4
1
2
2
6
5
1
2
64
0
1
3
7.3
1
1
3
10
2
1
3
14
3
1
3
20
4
1
3
3
1
5
1
3
84
0
1
4
9.1
1
1
4
12
2
1
4
17
3
1
4
23
4
1
4
3
5
5
1
4
110
0
1
5
11
1
1
5
14
2
1
5
19
3
1
5
27
4
1
5
4
2
5
1
5
130
0
2
0
3.7
1
2
0
6.
1
2
2
0
9.
3
3
2
0
14
4
2
0
2
2
5
2
0
49
0
2
1
5.5
1
2
1
8.
2
2
2
1
12
3
2
1
17
4
2
1
2
6
5
2
1
70
0
2
2
7.4
1
2
2
10
2
2
2
14
3
2
2
20
4
2
2
3
2
5
2
2
95
0
2
3
9.2
1
2
3
12
2
2
3
17
3
2
3
24
4
2
3
3
8
5
2
3
120
0
2
4
11
1
2
4
15
2
2
4
19
3
2
4
27
4
2
4
4
4
5
2
4
150
0
2
5
13
1
2
5
17
2
2
5
22
3
2
5
31
4
2
5
5
0
5
2
5
180
0
3
0
5.6
1
3
0
8.
3
2
3
0
12
3
3
0
17
4
3
0
2
7
5
3
0
79
 
0
3
1
7.4
1
3
1
10
2
3
1
14
3
3
1
21
4
3
1
3
3
5
3
1
110
0
3
2
9.3
1
3
2
13
2
3
2
17
3
3
2
24
4
3
2
3
9
5
3
2
140
0
3
3
11
1
3
3
15
2
3
3
20
3
3
3
28
4
3
3
4
5
5
3
3
180
0
3
4
13
1
3
4
17
2
3
4
22
3
3
4
31
4
3
4
5
2
5
3
4
210
0
3
5
15
1
3
5
19
2
3
5
25
3
3
5
35
4
3
5
5
9
5
3
5
250
0
4
0
7.5
1
4
0
11
2
4
0
15
3
4
0
21
4
4
0
3
4
5
4
0
130
0
4
1
9.4
1
4
1
13
2
4
1
17
3
4
1
24
4
4
1
4
0
5
4
1
170
0
4
2
11
1
4
2
15
2
4
2
20
3
4
2
28
4
4
2
4
7
5
4
2
220
0
4
3
13
1
4
3
17
2
4
3
23
3
4
3
32
4
4
3
5
4
5
4
3
280
0
4
4
15
1
4
4
19
2
4
4
25
3
4
4
36
4
4
4
6
2
5
4
4
350
0
4
5
17
1
4
5
22
2
4
5
28
3
4
5
40
4
4
5
6
9
5
4
5
430
0
5
0
9.4
1
5
0
13
2
5
0
17
3
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0
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4
1
5
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0
240
0
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1
11
1
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1
15
2
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29
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1
4
8
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350
0
5
2
13
1
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17
2
5
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23
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6
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15
1
5
3
19
2
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3
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4
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6
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920
0
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17
1
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22
2
5
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29
3
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7
2
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0
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19
1
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3
5
5
45
4
5
5
8
1
5
5
5
>160
0
Fuente: AOAC 18a. Edición. Revisión 2, 2007 Table 978.23.
A.2.2 Método de presencia ausencia (P-A).
A.2.2.1 Fundamento.
Es una modificación del método de NMP simplificado, que permite utilizar volúmenes grandes de muestra (100 mL) para obtener información cualitativa de presencia ausencia de Pseudomonas aeruginosa.
Transferir 100 mL de muestra de agua a un volumen de 50 mL o 20 mL de caldo asparagina. Considerar el volumen final de muestra y caldo para ajustar la concentración de medio (véase A.2.1.4), continuar de acuerdo a lo indicado (véase A.2.1.7.2.1.1.2).
A.2.2.2 Expresión de los resultados.
A.2.2.2.1 El desarrollo de un color rojo en los tubos con caldo acetamida o placa o agar acetamida dentro de las 24 h a 36 h incubados de 35 °C ±1 °C, se considera como una prueba confirmativa para la presencia de Pseudomonas aeruginosa.
A.2.2.3 Informe de prueba.
A.2.2.3.1 Presencia de Pseudomonas aeruginosa en 100 mL. o
A.2.2.3.2 Ausencia de Pseudomonas aeruginosa en 100 mL.
A.2.3 Método de filtración por membrana.
A.2.3.1 Fundamento.
Es un método que se basa en la filtración de un volumen específico de agua a través de un filtro de
membrana con tamaño de poro de 0.45 mm. El filtro es colocado en un agar selectivo incubado a 41.5 ±0.5 °C.
Las colonias cafés con centro oscuro son confirmadas en agar leche en el cual se hidroliza la caseína produciendo un pigmento de amarillo a verde que se difunde en el agar.
A.2.3.2 Materiales.
A.2.3.2.1 Cajas Petri de vidrio de borosilicato o plástico estériles de 60 x 15 mm o 50 x 9 mm u otro tamaño apropiado.
A.2.3.2.2 Portafiltros esterilizables de plástico, porcelana, acero inoxidable o vidrio.
A.2.3.2.3 Matraz Kitazato.
A.2.3.2.4 Membranas para filtración estériles con poro de 0.45 µm.
A.2.3.2.5 Pinzas de acero inoxidable para membrana.
A.2.3.2.6 Contador mecánico o manual de Tally o equivalente.
A.2.3.2.7 Portaasa y asa bacteriológica.
A.2.3.3 Aparatos e instrumentos.
A.2.3.3.1 Bomba de vacío (20-27 pulgadas Hg), tubería y aditamentos herméticos para mantener el vacío.
A.2.3.3.2 Sistema de filtración.
A.2.3.3.3 Balanza granataria con sensibilidad de 0.1 g.
A.2.3.3.4